Ezrin在星形細(xì)胞瘤的表達(dá)意義及黃芩素對(duì)SHG-44細(xì)胞ezrin表達(dá)、增殖和活動(dòng)的影響.pdf

1、第一章 Fzrin在人腦星形細(xì)胞瘤的表達(dá)意義 目的：探討膜-細(xì)胞骨架聯(lián)接蛋白埃茲蛋白(Ezrin)在人腦星形細(xì)胞瘤中的表達(dá)及意義。 方法：應(yīng)用免疫組織化學(xué)SABC方法，檢測(cè)107例人腦星形細(xì)胞瘤和10例正常腦組織中Ezrin的表達(dá)，并結(jié)合臨床隨訪資料分析表達(dá)水平與星形細(xì)胞瘤臨床預(yù)后的相關(guān)性。 結(jié)果：Ezrin的表達(dá)在人腦星形細(xì)胞瘤組和對(duì)照組之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。在107例的星形細(xì)胞瘤組織中發(fā)現(xiàn)9

2、6例Ezrin陽(yáng)性表達(dá)，陽(yáng)性表達(dá)率為89.7％，Ezrin表達(dá)與腫瘤惡性程度呈正相關(guān)(r=0.551，P<0。01)，結(jié)合臨床病理資料分析發(fā)現(xiàn)Ezrin的表達(dá)水平和腫瘤細(xì)胞分化、瘤周水腫程度具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。Ezrin強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)組和弱陽(yáng)性+陰性表達(dá)組的術(shù)后無(wú)瘤生存時(shí)間之間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=29.85，P=0.000)。 結(jié)論：Ezrin的表達(dá)水平與人腦星形細(xì)胞瘤的惡性程度密切相關(guān)，Ezrin的過(guò)度表達(dá)對(duì)星形

3、細(xì)胞瘤發(fā)展起重要作用，提示Ezrin可以作為反映星形細(xì)胞瘤預(yù)后的一種有價(jià)值的分子標(biāo)志物。 第二章黃芩素對(duì)SHG-44細(xì)胞增殖、侵襲遷移的影響 目的：觀察黃芩素干預(yù)人星形細(xì)胞瘤SHG-44細(xì)胞株后，腫瘤細(xì)胞周期、增殖以及運(yùn)動(dòng)侵襲能力的變化。 方法：以體外培養(yǎng)的人星形細(xì)胞瘤SHG-44細(xì)胞為研究對(duì)象，用黃芩素干預(yù)后，顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)變化，MTT法觀察細(xì)胞增殖，流式細(xì)胞儀(FCM)分析細(xì)胞周期，侵襲小室實(shí)驗(yàn)觀察細(xì)胞侵

4、襲力改變，蛋白質(zhì)印跡法(Western Blot)檢測(cè)細(xì)胞MMP2、MMP9、survivin、cyclinD蛋白表達(dá)的變化。 結(jié)果：1、MTT法觀察黃芩素對(duì)SHG-44細(xì)胞增殖的抑制作用隨時(shí)間的延長(zhǎng)和藥物濃度的增加，抑制作用逐漸增強(qiáng)，有明顯的時(shí)間和劑量依賴性；2、流式細(xì)胞儀檢測(cè)顯示隨黃芩素濃度增加，凋亡率增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；黃芩素將腫瘤細(xì)胞阻滯于G0/G1期，與對(duì)照組比較S期細(xì)胞減少近18％，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意

5、義(P<0.05)；3、侵襲小室實(shí)驗(yàn)證實(shí)隨著黃芩素干預(yù)濃度增加，SHG-44細(xì)胞48h后穿過(guò)人工基底膜的細(xì)胞數(shù)量明顯更少，與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；4、黃芩素呈濃度依賴性地抑制SHG-44細(xì)胞MMP2、MMP9及survival、cyclinD蛋白的表達(dá)。 結(jié)論：1.黃芩素對(duì)SHG-44細(xì)胞增殖的抑制作用呈時(shí)間和劑量依賴性；2.48h黃芩素抑制SHG44細(xì)胞增殖的IC50為13.77μM；3.黃芩素抑制SHG

6、44細(xì)胞侵襲遷移；4.黃芩素對(duì)星形細(xì)胞瘤治療具有潛在應(yīng)用價(jià)值。 第三章黃芩素對(duì)SHG-44細(xì)胞Ezrin的表達(dá)和運(yùn)動(dòng)的影響 目的：比較siRNA下調(diào)Ezrin在人腦星形細(xì)胞瘤SHG-44細(xì)胞中的表達(dá)，與黃芩素干預(yù)后，腫瘤細(xì)胞運(yùn)動(dòng)能力的變化，探討黃芩素是否通過(guò)抑制Ezrin蛋白表達(dá)及活化實(shí)現(xiàn)抗腫瘤的機(jī)制。 方法：以體外培養(yǎng)的人星形細(xì)胞瘤SHG-44細(xì)胞為研究對(duì)象，黃芩素干預(yù)后，蛋白質(zhì)印跡法(Western Blot

7、)檢測(cè)細(xì)胞Ezrin、磷酸化Ezrin表達(dá)的變化，逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)檢測(cè)細(xì)胞Ezrin mRNA表達(dá)量。進(jìn)一步運(yùn)用siRNA技術(shù)下調(diào)Ezrin細(xì)胞中的表達(dá)，劃痕愈合實(shí)驗(yàn)和掃描電鏡觀察細(xì)胞運(yùn)動(dòng)和形態(tài)在干擾前后與黃芩素干預(yù)后變化。 結(jié)果：黃芩素呈濃度依賴性地抑制Ezrin，磷酸化Ezrin及Ezrin-mRNA在SHG-44細(xì)胞中的表達(dá)，與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。siRNA下調(diào)Ezrin在SHG