神經(jīng)損傷對(duì)Wistar大鼠股骨干骨折早期骨痂形成影響的基礎(chǔ)研究.pdf

1、骨折愈合是一個(gè)極其復(fù)雜的生物學(xué)修復(fù)過(guò)程，受到許多因素的影響，如何促進(jìn)骨折愈合一直是眾多醫(yī)學(xué)工作者所孜孜不倦研究的重要課題之一。神經(jīng)系統(tǒng)對(duì)人體各個(gè)系統(tǒng)很多生理病理過(guò)程都具有調(diào)節(jié)作用。在正常骨發(fā)育及骨損傷修復(fù)過(guò)程中，骨組織中有大量的神經(jīng)纖維分布。在骨折的愈合過(guò)程中，骨痂構(gòu)建形成和重建也是在神經(jīng)系統(tǒng)調(diào)節(jié)下進(jìn)行的，完整的神經(jīng)支配對(duì)正常的骨折愈合過(guò)程是必需的。神經(jīng)系統(tǒng)對(duì)骨折愈合的調(diào)節(jié)包括中樞和外周兩個(gè)方面，這兩個(gè)方面既相互聯(lián)系又相互區(qū)別。臨床實(shí)踐

2、中觀察到，伴有神經(jīng)(中樞神經(jīng)/周圍神經(jīng))損傷的骨折患者，往往可見(jiàn)到骨痂的異常生長(zhǎng)，甚至在肌肉中出現(xiàn)異位骨化。這一現(xiàn)象引發(fā)了人們的思考，也引起了許多學(xué)者的興趣。早在1880年Variot和Remy就曾采用組織染色法觀察到在人和動(dòng)物的骨組織中存在神經(jīng)纖維。此后國(guó)內(nèi)外學(xué)者在這一領(lǐng)域陸續(xù)開(kāi)展了一系列研究，對(duì)神經(jīng)在骨折愈合中的作用機(jī)理提出了很多假說(shuō)，但其中的確切機(jī)制目前仍為明確。骨折愈合過(guò)程的顯微結(jié)構(gòu)改變能很好的反映骨痂形成和構(gòu)建的細(xì)胞學(xué)過(guò)程。它

3、是骨痂形成和構(gòu)建過(guò)程研究的重要手段。了解神經(jīng)組織損傷與骨折愈合的關(guān)系，對(duì)骨組織的神經(jīng)支配有更明確的認(rèn)識(shí)，對(duì)于臨床治療骨不連、異位骨化和骨質(zhì)疏松均具有潛在的應(yīng)用前景。
　　 目的：本課題通過(guò)建立Wistar大鼠神經(jīng)(中樞神經(jīng)/周圍神經(jīng))損傷合并股骨干橫斷骨折動(dòng)物模型，在骨折愈合早期不同時(shí)間節(jié)點(diǎn)，對(duì)新生骨痂進(jìn)行影像學(xué)及組織切片測(cè)量，探討失神經(jīng)狀態(tài)下與正常神經(jīng)支配下Wistar大鼠股骨干橫斷骨折愈合情況的差異，及不同神經(jīng)(中樞神經(jīng)/周

4、圍神經(jīng))缺失下Wistar大鼠股骨干橫斷骨折愈合情況的異同。
　　 方法：實(shí)驗(yàn)于2008年9月～2009年10月在第二軍醫(yī)大學(xué)動(dòng)物中心完成。3月齡雄性Wistar大鼠120只(由上海市中科院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供)，體重274～295g(284.81±4.04)g。隨機(jī)分為3組，每組40只，分別為：?jiǎn)渭児晒歉晒钦劢M(simple fermoralfracture group，SFF組)、同側(cè)坐骨神經(jīng)橫斷+股骨干骨折組(nervi is

5、chiadius resectiongroup，NIR組)、T10脊髓橫斷+股骨干骨折組(spinal cord injury group，SCI組)。用10％水合氯醛(300mg/kg)腹腔麻醉。①SFF組大鼠造模：大鼠俯臥位固定于解剖臺(tái)板上，取右下肢1 cm長(zhǎng)髕骨內(nèi)緣縱切口，縱行切開(kāi)部分股四頭肌腱性組織，將髕骨牽向內(nèi)側(cè)脫位，自股骨髁間凹沿股骨髓腔逆行插入一根直徑1 mm髓內(nèi)針(10號(hào)注射針頭，針尖已剪除)至股骨粗隆，用骨折鉗鉗夾股骨

6、干中段，造成橫行骨折，注意勿剪斷髓內(nèi)針；②NIR組大鼠造模：股骨干骨折造模同SFF組。經(jīng)股前、外側(cè)肌間隔分離找到坐骨神經(jīng)，用鋒利手術(shù)刀切去約1 mm。③SCI組大鼠造模：股骨干骨折造模同SFF組。取背部正中切口，切開(kāi)背正中皮膚及皮下，剝離棘突旁肌，暴露T10椎板，切除T10棘突及椎板，顯露T10脊髓硬膜，用尖刀片將脊髓橫斷，切除約2 mm，創(chuàng)面覆蓋明膠海綿以利于止血。術(shù)后實(shí)驗(yàn)大鼠均單籠飼養(yǎng)，自然光照，周期定時(shí)添足飼料，飲水不加限制。SC

7、I組大鼠行人工按摩膀胱排尿，1次/6小時(shí)，直至膀胱恢復(fù)自動(dòng)排尿，每2～3d更換一次墊料，保持干燥。分別于術(shù)后2 w、4 w處死實(shí)驗(yàn)大鼠，進(jìn)行X線骨痂寬度測(cè)量、股骨標(biāo)本濕重稱重、骨痂HE染色、骨痂免疫組化、不脫鈣重力切片苦味酸——品紅染色、骨組織靜態(tài)形態(tài)計(jì)量學(xué)測(cè)量。
　　 結(jié)果：①術(shù)后2周鏡下組織形態(tài)學(xué)觀察可見(jiàn)：SFF組，成骨細(xì)胞為主，新生軟骨少，骨痂致密，類骨質(zhì)少。NIR組：新生軟骨細(xì)胞為主，細(xì)胞疏松，成骨細(xì)胞少，骨痂稀疏，類骨

8、質(zhì)多。SCI組：呈現(xiàn)新生軟骨細(xì)胞向成熟軟骨細(xì)胞過(guò)渡的狀態(tài)，骨痂密度低，以軟骨細(xì)胞為主。術(shù)后4周鏡下組織形態(tài)學(xué)觀察可見(jiàn)：SFF組，成骨細(xì)胞增多，排列更加緊密，有散在的破骨細(xì)胞，新生營(yíng)養(yǎng)血管已經(jīng)形成，骨小梁致密，順力線排列規(guī)律，皮質(zhì)骨可見(jiàn)散在骨陷窩。NIR組：成骨細(xì)胞排列較SFF組疏松，破骨細(xì)胞基本消失，新生營(yíng)養(yǎng)血管較多骨小梁稀疏；SCI組：成骨細(xì)胞散在分布，未發(fā)現(xiàn)破骨細(xì)胞，骨小梁排列紊亂、稀疏，骨陷窩較多。②用軟件SPSS11.0進(jìn)行數(shù)據(jù)

9、統(tǒng)計(jì)：術(shù)后2周、4周，股骨X線骨痂寬度測(cè)量對(duì)比，SFF組與NIR組間、SFF與SCI組均間比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)，NIR組與SCI組間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)；術(shù)后2周、4周，股骨濕重SFF組與NIR組間比較、SFF與SCI組間比較均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)，NIR組與SCI組間比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。
　　 結(jié)論：骨痂的形成雖然是骨折愈合的必要條件，但骨折愈合的質(zhì)量不在于骨痂數(shù)量的多少、體積的