恩度聯(lián)合順鉑不同給藥時(shí)序?qū)57-BL6小鼠Lewis肺癌移植瘤的影響.pdf

1、 目的：肺癌是當(dāng)今世界上最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一,盡管抗血管生成治療聯(lián)合細(xì)胞毒療法在臨床中取得了較為矚目的療效,但是如何更有效地將這兩類藥物以最佳時(shí)序聯(lián)合應(yīng)用,進(jìn)一步提高療效,仍是目前抗血管生成的研究方向之一。本研究將重組人血管內(nèi)皮抑素以不同給藥時(shí)序聯(lián)合順鉑對(duì)Lewis肺癌動(dòng)物模型進(jìn)行處理,計(jì)算腫瘤體積及抑瘤率,測(cè)定腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞周期分布、瘤組織的微血管密度及順鉑濃度,從而闡明恩度聯(lián)合順鉑的最佳給藥時(shí)序,并初步探討其可能的機(jī)制。方法：本實(shí)

2、驗(yàn)第一部分取35只C57/BL6小鼠,隨機(jī)分成5組,每組7只,接種Lewis肺癌細(xì)胞建立Lewis肺癌小鼠模型,將瘤塊進(jìn)行體內(nèi)代3代后得到實(shí)驗(yàn)小鼠,開(kāi)始藥物干預(yù)：生理鹽水組(空白對(duì)照組)、恩度組(10 mg/kg/d D1—D14)、順鉑組(4 mg/kg/d D1、D8)、恩度和順鉑同時(shí)使用組(恩度10 mg/kg/d D1—D14、順鉑4 mg/kg/d D1、D8)、先恩度后順鉑組(恩度10 mg/kg/d D1—D14、順鉑4

3、mg/kg/d D5、D12),每組均為腹腔注射給藥。觀察小鼠的生長(zhǎng)情況,測(cè)量小鼠的腫瘤體積,給藥結(jié)束24小時(shí)后頸椎脫臼法處死小鼠,獲取腫瘤組織,測(cè)稱取腫瘤重量,計(jì)算抑瘤率及q值,免疫組化檢測(cè)MVD,流式細(xì)胞檢測(cè)瘤細(xì)胞周期分布,并計(jì)算比較PI值。第二部分取60只C57/BL6小鼠,隨機(jī)分成單用順鉑組、恩度與順鉑同時(shí)使用組和先恩度4天后順鉑組,每組20只,每組分別于注射順鉑第1天、3天、5天、8天(每組每個(gè)時(shí)間點(diǎn)5只小鼠)時(shí)進(jìn)行眼眶取血,

4、并處死小鼠,HPLC 檢測(cè)血液及瘤組織中 DDP 濃度,免疫組化檢測(cè)各組不同各時(shí)間點(diǎn)瘤組織 MVD ,比較各組 DDP 濃度及MVD變化有無(wú)差異及兩者間關(guān)系。結(jié)果：1、各組用藥前的瘤體積比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。用藥結(jié)束后,順鉑組、同時(shí)用藥組、先后用藥組小鼠的瘤體積、瘤重明顯<對(duì)照組(P <0.05),其中同時(shí)組又明顯<順鉑組、先后組(P <0.05)。先后組的協(xié)同指數(shù)q 值等于1.095,表現(xiàn)為相加效應(yīng),而同時(shí)組的q 值等

5、于1.564,表現(xiàn)為協(xié)同作用,同時(shí)用藥能夠?qū)π∈?Lewis 肺癌移植瘤生長(zhǎng)超到更好地抑制作用。2、藥物作用于腫瘤細(xì)胞后,細(xì)胞周期分布分生了明顯變化。與對(duì)照組相比,恩度組、同時(shí)組和先后組瘤細(xì)胞G0/G1期比例增加,S期比例下降,增殖指數(shù)PI明顯下降(P<0.05)。且同時(shí)組與先后組相比 G0/G1 期比例增加、S 期比例下降(P<0.05),增殖指數(shù) PI 下降(P<0.05)。3、恩度組、順鉑組、同時(shí)組、先后組的MVD均低于對(duì)照組,其

6、中同時(shí)組MVD最低,對(duì)比恩度組P=0.004,對(duì)比先后組P=0.021。先后組與恩度組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。4、在注射順鉑第三天時(shí),同時(shí)組腫瘤組織中DDP濃度已高于血液中DDP濃度,且同時(shí)組腫瘤組織中濃度較先后組、順鉑組均高(P<0.05),至第8天再次給藥后,同時(shí)組腫瘤組織中DDP濃度最高,達(dá)3.794±0.210 μg/ml,但先后組與順鉑組之間無(wú)顯著差異。5、在給藥后第 5 天同時(shí)組 MVD明顯低于順鉑組(P<0.05)。第8天再次給

7、藥后,先后組、同時(shí)組的MVD 均較順鉑組更低(P <0.01),其中同時(shí)組最低,同時(shí)組對(duì)比先后組P =0.047。結(jié)論：1、恩度與順鉑同時(shí)使用時(shí)能更明顯地抑制小鼠 Lewis 肺癌移植瘤的生長(zhǎng),兩者同時(shí)使用時(shí)具有協(xié)同抗腫瘤的作用,而先恩度后順鉑僅具有相加抗腫瘤的作用。2、順鉑與恩度同時(shí)使用可以明顯改善細(xì)胞周期分布,使更多腫瘤細(xì)胞處于 G0/G1 期,減少S期細(xì)胞數(shù)量,降低細(xì)胞增殖。3、恩度聯(lián)合順鉑較單藥組能更大程度地降低瘤組織MVD,且