AE1在胃和結(jié)腸腺癌組織中的表達(dá)及其致癌作用的研究.pdf

1、陰離子交換蛋白1（anion exchanger，AE1）又名帶3蛋白，是存在于紅細(xì)胞膜上的主要內(nèi)在性糖蛋白質(zhì)，介導(dǎo)Cl-和HCO3-跨膜交換過程，調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)的pH值。我們在對AE1C端域結(jié)構(gòu)與功能進(jìn)行研究的過程中發(fā)現(xiàn)并報道了AE1與關(guān)鍵的腫瘤抑制蛋白（p16）直接相互作用。這是國內(nèi)外關(guān)于膜蛋白質(zhì)與p16結(jié)構(gòu)與功能相關(guān)的首次報道。 P16通過與CDK4/CDK6直接相互作用負(fù)調(diào)節(jié)細(xì)胞周期。由于在大量的臨床腫瘤病例中發(fā)現(xiàn)了高頻率的

2、p16缺失和突變，使之與p53一樣成為眾多腫瘤相關(guān)蛋白中重要的研究目標(biāo)。十余年來基礎(chǔ)和臨床研究發(fā)現(xiàn)p16除調(diào)節(jié)細(xì)胞周期外，還有其他多重生物學(xué)功能，但是，這些研究主要將目光集中在p16調(diào)節(jié)的對象而忽略了（或沒有突破）p16本身受哪些因素的調(diào)控。P16與AE1相互作用的發(fā)現(xiàn)，為AE1及p16功能的調(diào)控提供了新的研究線索。 為深入研究AE1和p16相關(guān)的生理和病理學(xué)意義，我們對6種腫瘤細(xì)胞系A(chǔ)E1、AE2和p16的表達(dá)進(jìn)行了檢測，We

3、stern blotting結(jié)果顯示所有腫瘤細(xì)胞都與正常組織一樣表達(dá)AE家族成員AE2，但AE1異常表達(dá)在胃腺癌和結(jié)腸腺癌細(xì)胞（正常組織不表達(dá)AE1），采用免疫細(xì)胞化學(xué)及膜漿分離的方法對兩種腫瘤細(xì)胞AE1和AE2進(jìn)行定位發(fā)現(xiàn)AE2主要定位于細(xì)胞膜，而AE1主要分布在細(xì)胞漿。通過核漿分離對p16在細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)進(jìn)行檢測，結(jié)果顯示該蛋白也異常分布在胃腺癌和結(jié)腸腺癌細(xì)胞漿，這一結(jié)果提示p16的胞漿分布可能與AE1的異常表達(dá)相關(guān)，Co-IP證明了

4、內(nèi)源性AE1和p16在兩種腫瘤細(xì)胞內(nèi)相互作用。由于AE1和AE2是調(diào)節(jié)細(xì)胞pH值的重要蛋白質(zhì)，AE1的異常表達(dá)可能影響細(xì)胞pH的正常調(diào)節(jié)，因此，我們采用離子成像分析系統(tǒng)對單個腫瘤細(xì)胞的pH進(jìn)行檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)胃腺癌和結(jié)腸腺癌比其他腫瘤細(xì)胞偏堿性。為排除p16在細(xì)胞漿內(nèi)的分布源于細(xì)胞內(nèi)pH的改變的可能性，本研究將胃腺癌和結(jié)腸腺癌細(xì)胞培養(yǎng)在酸性環(huán)境（pH6.0）中12-72小時，結(jié)果證明胃腺癌細(xì)胞p16的表達(dá)水平在酸性環(huán)境培養(yǎng)下36-48小時

5、升高、72小時下降。結(jié)腸腺癌細(xì)胞p16的表達(dá)水平不變化。P16在兩種腫瘤細(xì)胞漿內(nèi)的定位未受酸性pH的影響。上述結(jié)果說明p16在兩種腫瘤細(xì)胞漿內(nèi)分布是通過與AE1直接相互作用而被扣押。在胃腺癌和結(jié)腸腺癌細(xì)胞過表達(dá)AE1扣押了更多的p16，而采用RNAi技術(shù)將AE1 knockdown，使p16釋放并重新定位于細(xì)胞核。穩(wěn)定knockdown AE1的腫瘤單克隆細(xì)胞出現(xiàn)生長抑制和死亡。通過本研究我們提出腫瘤發(fā)生相關(guān)的p16功能失調(diào)的新機(jī)制。