還原型β2糖蛋白Ⅰ經(jīng)VEGFR-2途徑抑制糖尿病視網(wǎng)膜血管新生的研究.pdf

1、目的:
　　 糖尿病視網(wǎng)膜病變(diabetic retinopathy, DR)是常見的糖尿病微血管并發(fā)癥之一，新生血管是增殖性糖尿病視網(wǎng)膜病變的特征性表現(xiàn)，也是糖尿病患者失明的主要原因之一。已有研究表明血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growthfactor, VEGF)參與糖尿病視網(wǎng)膜病變的發(fā)生與發(fā)展。我們前期研究發(fā)現(xiàn)還原型β2糖蛋白Ⅰ可抑制氧誘導的新生小鼠的視網(wǎng)膜血管新生。本研究以2型糖尿病大

2、鼠為研究對象，探討:1.還原型β2糖蛋白Ⅰ及β2糖蛋白Ⅰ對糖尿病大鼠視網(wǎng)膜新生血管的影響;2.還原型β2糖蛋白Ⅰ及β2糖蛋白Ⅰ影響糖尿病大鼠視網(wǎng)膜新生血管的作用機制。
　　 方法:
　　 1.造模SD大鼠隨機分2組，正常對照組普通飼料喂養(yǎng);模型組大鼠高脂飲食8周，穩(wěn)態(tài)模型胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)檢測胰島素抵抗(IR)，尾靜脈注射鏈脲佐菌素(STZ)35mg/kg，1周后尾靜脈取血監(jiān)測隨機血糖，血糖≥16.7mmo

3、l/L認為糖尿病成模。實驗共分為四組:①NC組，玻璃體腔內(nèi)注射3μL PBS;②糖尿病對照組，玻璃體腔內(nèi)注射3μL PBS;③還原型β2糖蛋白Ⅰ組，玻璃體腔內(nèi)注射3μL還原型β2糖蛋白Ⅰ（800μg/mL）;④β2糖蛋白Ⅰ組，玻璃體腔內(nèi)注射3μLβ2糖蛋白Ⅰ（800μg/mL）。干預4周后，股動脈放血處死大鼠，取血標本檢測肝腎功能、血脂、血糖、血清胰島素生化指標，迅速摘取眼球，部分甲醛浸泡，用于病理切片，剩下的迅速液氮凍存，以備熒光實時

4、定量PCR及Western Blot檢測mRNA和蛋白的表達。
　　 2.用HE染色研究還原型β2糖蛋白Ⅰ及β2糖蛋白Ⅰ對2型糖尿病大鼠視網(wǎng)膜各層組織結(jié)構(gòu)的影響。
　　 3.用熒光實時定量PCR法研究還原型β2糖蛋白Ⅰ及β2糖蛋白Ⅰ對2型糖尿病大鼠視網(wǎng)膜組織內(nèi)VEGF及其受體(vascular endothelial growth factor receptor-1，VEGFR-1或Flt-1)、VEGFR-2(vasc

5、ular endothelial growth factor receptor-2,VEGFR-2或KDR) mRNA表達的影響。
　　 4.用Western Blot法研究還原型β2糖蛋白Ⅰ及β2糖蛋白Ⅰ對2型糖尿病大鼠視網(wǎng)膜組織內(nèi)VEGF受體后信號轉(zhuǎn)導途徑關鍵蛋白PI3K-Akt及MAPK-ERK1/2表達的影響。
　　 結(jié)果:
　　 1.與正常組相比，糖尿病組視網(wǎng)膜內(nèi)界膜紊亂，內(nèi)皮細胞數(shù)減少，可見未突出內(nèi)界

6、膜的新生血管芽;與糖尿病組相比，還原型β2糖蛋白Ⅰ與β2糖蛋白Ⅰ干預組視網(wǎng)膜內(nèi)界膜較光滑，內(nèi)皮細胞數(shù)較多，未見新生血管;與β2糖蛋白Ⅰ干預組相比，還原型β2糖蛋白Ⅰ干預組視網(wǎng)膜內(nèi)界膜較完整、光滑，未見新生血管。
　　 2.與糖尿病對照相比，還原型β2糖蛋白Ⅰ和β2GPI組VEGFmRNA表達量增多，差異有統(tǒng)計學意義(P均＜0.05），而VEGFR-及VEGFR-2mRNA表達量減少，差異有統(tǒng)計學意義(P均＜0.05）;與β2糖蛋

7、白Ⅰ干預組相比，還原型β2糖蛋白Ⅰ干預組VEGF mRNA表達量增高，而VEGFR-1及VEGFR-2 mRNA表達量下降，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05）。
　　 3.與糖尿病對照組相比，還原型β2糖蛋白Ⅰ和β2糖蛋白Ⅰ組p-Akt、p-ERK1/2表達量降低，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05）;與β2糖蛋白Ⅰ干預組相比，還原型β2糖蛋白Ⅰ組p-Akt、p-ERK1/2表達量降低，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。