以腫瘤新生微血管內(nèi)皮細(xì)胞為靶點(diǎn)的腫瘤基因治療及微循環(huán)學(xué)實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文以腫瘤新生微血管內(nèi)皮細(xì)胞為靶點(diǎn)的腫瘤基因治療及微循環(huán)學(xué)實(shí)驗(yàn)研究姓名：賈士東申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：生物醫(yī)學(xué)工程指導(dǎo)教師：修瑞娟賀福初2000.7.1中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文2中文摘要腫瘤的生長(zhǎng)要求持續(xù)的血管新生束提供養(yǎng)分，抑制腫瘤血管新生療法可以控制腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移，伯前受到廣泛矚目。相對(duì)抗腫瘤血管新生的蛋白療法需重復(fù)給藥和費(fèi)用高昂的缺點(diǎn)基因治療可以長(zhǎng)期、穩(wěn)定、廉價(jià)地表達(dá)外源抗血管新生蛋白達(dá)到異曲同工的效果

2、。但是目前抗腫瘤血管新生的研究基本都局限于腫瘤細(xì)胞本身，缺乏對(duì)腫瘤微血管和微循環(huán)的觀察。因此j本研究通過(guò)小鼠內(nèi)皮抑制素(Endostatin，Es)基因治療柬研究抗腫瘤血管新生療法對(duì)腫瘤生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移的抑制作用，以及對(duì)腫瘤微循環(huán)功能的影響。映驗(yàn)包括下列內(nèi)容：L1以昆明小鼠肝臟總RNA為模板，經(jīng)RTPCR克隆獲得了EscDNA并測(cè)序?qū)嵶C，構(gòu)建pSecTa92Es(Es)、pSecTa92一ES—TT(ESTT，TT源自t啪orneovaScu

3、laturetal苫etingpeptide)真核表達(dá)重組質(zhì)粒，轉(zhuǎn)染Cos7細(xì)胞均獲融合蛋白表達(dá)，該轉(zhuǎn)染細(xì)胞上清可以誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞凋亡、抑制內(nèi)皮細(xì)胞增殖：其中，Es組抑制內(nèi)皮細(xì)胞增殖的作用強(qiáng)于EsTT組(p005)。2在9同齡雞胚尿囊膜血管新生實(shí)驗(yàn)中，psecTa92一Es與甲基纖維素聯(lián)合作用于雞胚尿囊膜新生血管網(wǎng)72小時(shí)，可以抑制微血管網(wǎng)絡(luò)的形成。3將荷Lewis癌的C57小鼠肌肉注射質(zhì)粒DNA或DNA伊VP40偶聯(lián)物，ELlSA檢測(cè)到

4、ES／PvP40組C57小鼠血清中融合蛋白的表達(dá)，在ES／PVP40組和Es1vI伊VP40組腫瘤組織中融合蛋白濃度無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。腫瘤組織切片電鏡檢查和組織學(xué)檢查可見(jiàn)ES／PVP40組和ES—T1什VP40組中腫瘤細(xì)胞的凋亡和壞死，紅染新生血管減少，但各組腫瘤細(xì)胞增殖未見(jiàn)差異。肺組織HE染色僅在空白對(duì)照組和空載體對(duì)照組中可見(jiàn)肺轉(zhuǎn)移。質(zhì)粒DNA與PVP40偶聯(lián)后，對(duì)腫瘤生長(zhǎng)的抑制效率均明顯提高。ES與ES—TT融合蛋白的表達(dá)可抑制腫瘤生長(zhǎng)