強直性脊柱炎患者外周血單個核細(xì)胞中5種microRNAs表達(dá)的檢測及miR-495對DVL-2蛋白的調(diào)控作用.pdf

1、目的：通過對AS患者PBMC中5種微小RNA(micro-RNA，miRNAs)表達(dá)量的檢測，篩選出差異性表達(dá)的miRNAs。探討miRNAs是否可以作為AS患者潛在的診斷標(biāo)志物，并對miR-495在DVL-2蛋白表達(dá)中的調(diào)控作用進(jìn)行研究。
　　方法：1.利用miRanda、StarBase等生物信息學(xué)軟件，篩選與AS致病密切相關(guān)的miRNAs。并利用Real-time PCR方法對臨床61例AS患者和31例健康者PBMC中miR

2、-17、miR-106、miR-181、miR-495和miR-30的表達(dá)情況進(jìn)行檢測，同時利用統(tǒng)計軟件對實驗結(jié)果進(jìn)行分析，篩選可以作為AS診斷潛在生物標(biāo)志物的miRNAs。
　　2.利用miRanda、StarBase等生物信息學(xué)軟件，以AS患者PBMC中表達(dá)量具有顯著性差異的miR-495為研究對象，對其潛在的靶基因進(jìn)行預(yù)測。通過雙熒光素酶報告基因系統(tǒng)及Western-Blot實驗驗證miR-495與DVL-2的靶向關(guān)系。

3、r>　　3.應(yīng)用ELISA對28例AS患者和14例健康者血漿中的DVL-2蛋白量進(jìn)行檢測，研究AS患者PBMC中miR-495的表達(dá)量與血漿中DVL-2蛋白水平的相關(guān)性以及miR-495通過靶向抑制DVL-2蛋白調(diào)控AS發(fā)病機制。
　　結(jié)果：1.在AS患者PBMC中表達(dá)上調(diào)的有miR-106與miR-30；表達(dá)下調(diào)miR-181(p<0.05)、miR-495(p<0.05)和miR-17。并分別對miR-181和miR-495作

4、為臨床診斷進(jìn)行ROC曲線分析，其中miR-181的AUG為0.697，敏感性達(dá)76.67％，特異性達(dá)54.84%，正確性為68.48%。通過對結(jié)果的分析，我們認(rèn)為miR-181對臨床診斷參考價值較低；而miR-495的AUG為0.729，敏感性達(dá)92.23%，特異性達(dá)58.06%，正確性為86.9%。結(jié)果表明，miR-495有望成為AS疾病潛在的診斷標(biāo)志物。
　　2.預(yù)測結(jié)果表明miR-495可以靶向作用于DVL-2基因。雙熒光素

5、酶報告結(jié)果表明：過表達(dá)miR-495可抑制 DVL-2的相對熒光素酶活性；相反抑制miR-495可增加DVL-2的相對熒光活性。Western-Blot結(jié)果表明：過表達(dá)miR-495可抑制DVL-2蛋白表達(dá)量；而抑制表達(dá)miR-495可促進(jìn)DVL-2蛋白的表達(dá)。由此我們認(rèn)為miR-495可以靶向抑制DVL-2。
　　3.進(jìn)一步通過 ELISA方法檢測臨床樣本血漿中DVL-2的表達(dá)情況，在AS患者中DVL-2的表達(dá)量明顯增高。并聯(lián)合