PMWS多病原混合感染的檢測(cè)及PCV2重組桿狀病毒培養(yǎng)的優(yōu)化.pdf

1、斷奶仔豬多系統(tǒng)障礙綜合征(Postweaning Multisystemic Wasting Syndrome，PMWS)自1991年在加拿大被首次報(bào)道以來(lái)，已經(jīng)在全世界許多國(guó)家蔓延，給養(yǎng)豬行業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。豬圓環(huán)病毒2型(Porcine circovirusⅡ，PCV2)是目前發(fā)現(xiàn)的最小的動(dòng)物DNA圓環(huán)病毒，它與一系列的豬的疾病有關(guān)，被認(rèn)為是斷奶仔豬繁殖障礙綜合征的主要病原，其混合感染的其他病原還有豬藍(lán)耳病病毒(PRRSV)、

2、豬輸血傳播病毒(PTTV)、以及豬細(xì)小病毒(PPV)等。如何及時(shí)的了解病毒的基因分布，流行趨勢(shì)等是有效針對(duì)病情進(jìn)行預(yù)防的手段。同時(shí)，本實(shí)驗(yàn)室對(duì)近年來(lái)在我國(guó)流行的PCV2基因進(jìn)行分析，取其共有序列(Consensus sequence)，通過(guò)密碼子優(yōu)化，提高表達(dá)量，克服了PCV2疫苗交叉保護(hù)性較低，在細(xì)胞上增殖滴度較低，不利于生產(chǎn)，等難題。將該段序列用桿狀病毒載體表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)，需要通過(guò)改善昆蟲(chóng)細(xì)胞的培養(yǎng)條件來(lái)提高病毒的表達(dá)量。
　　

3、本研究主要分為三個(gè)部分，主要是對(duì)出現(xiàn)臨床癥狀的病豬和健康豬采樣并對(duì)相關(guān)病原進(jìn)行檢測(cè)，從PCV2的分子流行病學(xué)角度出發(fā)，觀測(cè)目標(biāo)地區(qū)的PCV2分布及其主要的基因型。最后一部分主要是以提高本實(shí)驗(yàn)室合成的重組桿狀病毒表達(dá)量為目的，改善昆蟲(chóng)細(xì)胞培養(yǎng)條件，實(shí)驗(yàn)內(nèi)容如下:
　　1、PMWS相關(guān)病原流行病學(xué)調(diào)查
　　在江蘇省的徐州、啟動(dòng)、泰州等養(yǎng)殖規(guī)模較大的地區(qū)進(jìn)行采樣，一共采集到970份組織樣品。利用PCR方法，進(jìn)行PMWS相關(guān)病原的檢

4、測(cè)，結(jié)果顯示，所有樣中PRRSV陽(yáng)性為20.88％(90/431)，PCV2陽(yáng)性率為25.36％(246/970)，PTTV1陽(yáng)率為42.65％(316/741)，PTTV2陽(yáng)性率為29.55％(219/741)，PPV陽(yáng)性率為3.5％(11/316)，PCV2與其他病原混合感染的陽(yáng)性率在19.8％到22.9％之間，TTV1和TTV2混合感染率高達(dá)31.07％。
　　2、豬圓環(huán)病毒2型分子流行病學(xué)調(diào)查
　　對(duì)采集到的24份P

5、CV2陽(yáng)性樣品，采用PCR方法擴(kuò)出全長(zhǎng)片段，測(cè)定全長(zhǎng)序列，分析得出24株P(guān)CV2全基因序列自身同源性在95.1％-100％之間，與分離株P(guān)CV2a(AF055392)比對(duì)，同源性在95.1％-96.7％之間，與PCV2b(AF055394)比對(duì)，同源性為95.2％-99.4％，與PCV2c(EU148503)比對(duì)，同源性為93.8％-95.1％。
　　3、優(yōu)化Sf9、High5細(xì)胞培養(yǎng)與重組病毒vFBHYH01-2/VFBHYH0