腦AVM易感基因的多態(tài)性分析及其在栓塞后和腦低灌注模型中的表達(dá).pdf

1、腦動(dòng)靜脈畸形(BAVM)是一種先天性腦血管疾病，常見(jiàn)的臨床表現(xiàn)包括出血、癲癇、頭痛及進(jìn)行性神經(jīng)功能障礙等，其中顱內(nèi)出血占BAVM臨床癥狀的50％以上，BAVM出血后的致死、殘率為15～30％。近年研究發(fā)現(xiàn)BAVM的發(fā)生、發(fā)展及臨床病理過(guò)程與多種因素(遺傳、炎癥、血管新生及細(xì)胞外基質(zhì)等)有關(guān)，但其具體生物學(xué)機(jī)制尚未闡明，繼續(xù)深入BAVM的相關(guān)研究、準(zhǔn)確評(píng)估其破裂出血風(fēng)險(xiǎn)、以及探索有效的防治措施，將有助于提高BAVM診治水平并改善預(yù)后。

2、 第一章腦AVM易感基因的單核苷酸多態(tài)性分析 目的：探討白細(xì)胞介素-17(IL-17A)，轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子—β(TGF—β)及其受體(TGFRβ2)的單核苷酸多態(tài)性(SNP)與BAVM易感及出血風(fēng)險(xiǎn)的相關(guān)性，為深入認(rèn)識(shí)BAVM相關(guān)分子生物機(jī)理及出血風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)提供部分線(xiàn)索和理論依據(jù)。 方法：前瞻性收集2006年12月～2008年12月來(lái)我院就診的BAVM患者53例(男34例，女19例)，平均年齡33.6±15.4歲；健康對(duì)照

3、人群120例來(lái)自我院體檢中心(男76例，女44例)，平均年齡36.8±17.3歲。采用聚合酶鏈反應(yīng)—限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性(PCR—RFLP)法，檢測(cè)BAVM患者與對(duì)照人群外周血IL-17A-197 G/A，TGFβ1-509 C/T及TGFRβ2-875A/G基因的SNP特征，并做關(guān)聯(lián)分析探討以上基因SNP與BAVM易感及出血風(fēng)險(xiǎn)的相關(guān)性。 結(jié)果：BAVM組與對(duì)照組比較，IL-17A-197 G/A基因型及基因頻率分布上有一定變

4、化，但尚未達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.09>0.05)，TGFβ1-509 C/T基因型及基因頻率分布的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，TGFRβ2-875 A/G基因型及基因頻率分布存在明顯差異(P<0.05)；BAVM出血組IL-17A-197 G/A和TGFRβ2-875A/G的G基因頻率明顯高于未出血組(P<0.05)，兩組TGFβ1-509 C/T基因型及基因頻率分布的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；同“人類(lèi)基因組計(jì)劃中不同人

5、群”的資料比較，本研究人群IL-17A-197 G/A和TGFRβ2-875 A/G基因型及基因頻率的分布同日本人、歐洲人及中國(guó)漢人(北方)差異無(wú)顯著性(P>0.05)，與拉丁美洲人群存在明顯變化(P<0.01)，TGFβ1-509 C/T基因型及基因頻率分布在種族間差異無(wú)顯著性(P>0.05)。 結(jié)論：TGFRβ2-875 G/G基因型可能是中國(guó)南方人群易感BAVM的危險(xiǎn)因素；IL-17A-197G/A和TGFRβ2-875

6、A/G的G基因型可能與BAVM易破裂出血風(fēng)險(xiǎn)有關(guān)；本研究人群在IL-17A-197 G/A及TGFRβ2-875 A/G多態(tài)性及遺傳背景上與拉丁美洲人群之間存在差異(P<0.05)。 第二章腦AVM易感基因在應(yīng)用Onyx栓塞后的表達(dá)研究 目的：探討Onyx在BAVM介入栓塞治療中的應(yīng)用價(jià)值；評(píng)價(jià)Onyx栓塞治療對(duì)畸形團(tuán)及其周?chē)M織在分子水平的影響，為深入認(rèn)識(shí)BAVM發(fā)展過(guò)程、臨床表現(xiàn)的差異及栓塞后的病理過(guò)程提供部分理論依

7、據(jù)。 方法：回顧分析應(yīng)用Onyx介入栓塞治療的BAVM患者34例(男21例、女13例)，平均年齡30.45±11.81歲，詳細(xì)記錄其病例臨床特征、治療經(jīng)過(guò)及相關(guān)并發(fā)癥；隨訪(fǎng)6個(gè)月～4年，以改良Rankin評(píng)分(mRS)評(píng)價(jià)預(yù)后；取12例栓塞后手術(shù)切除的BAVM標(biāo)本作為研究對(duì)象，選擇同期在我院?jiǎn)渭兪中g(shù)治療切除的13例BAVM及6例正常腦組織標(biāo)本(來(lái)源于外傷及腦出血內(nèi)減壓術(shù)后標(biāo)本)作為對(duì)照，應(yīng)用光鏡和透射電鏡觀(guān)察栓塞后手術(shù)切除的畸形

8、團(tuán)及其周?chē)X組織病理特征；采用免疫組化和實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qRT—PCR)技術(shù)，檢測(cè)手術(shù)切除的BAVM(栓塞及未栓塞)及對(duì)照組標(biāo)本IL-17A，TGF—β，VEGF及HIF-1基因在蛋白質(zhì)及mRNA水平的表達(dá)，評(píng)價(jià)應(yīng)用Onyx栓塞后對(duì)畸形團(tuán)及其周?chē)M織在分子水平的影響。 結(jié)果：Onyx栓塞BAVM的平均閉塞率為72.35％，其中畸形團(tuán)完全閉塞率為29.24％，栓塞相關(guān)的永久并發(fā)癥為6％；本組11例單純采用栓塞治療，12例聯(lián)合顯

9、微手術(shù)切除，10例栓塞后放療，1例為外院手術(shù)后殘留病灶，放療3年后仍未閉塞再來(lái)我院栓塞治療。隨訪(fǎng)結(jié)果顯示總的預(yù)后優(yōu)良率(mRS＜3分)為94％。栓塞后周?chē)M織會(huì)出現(xiàn)微血管擴(kuò)張、血腦屏障結(jié)構(gòu)破壞、神經(jīng)細(xì)胞腫脹、小血管周?chē)[及炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)；部分標(biāo)本可觀(guān)察到已栓塞的血管腔內(nèi)有血栓形成及再通現(xiàn)象；與對(duì)照組相比，BAVM(栓塞及未栓塞)周?chē)X組織在IL17A，VEGF，TGF—β及HIF-1基因的表達(dá)上有明顯差異(P＜0.05)；免疫組化結(jié)果顯

10、示栓塞組VEGF及HIF-1表達(dá)高于未栓塞組(P＜0.05)，而IL-17表達(dá)低于與未栓塞組(P＜0.05)，TGF—β表達(dá)兩組差異無(wú)顯著性(P＞0.05)；qRT—PCR檢測(cè)結(jié)果表明BAVM栓塞后畸形團(tuán)周?chē)M織IL-17，VEGF及TGF—β基因在mRNA水平的表達(dá)高于未栓塞組(P＜0.05)；而HIF-1基因表達(dá)低于未栓塞組(P＜0.05)。 結(jié)論：Onyx作為一種非粘附性栓塞劑在BAVM介入治療中具有操作簡(jiǎn)單、可控性強(qiáng)、相

11、對(duì)安全及栓塞效率高等優(yōu)點(diǎn)，適用于BAVM的介入治療；TGF—β可能作為一種保護(hù)因子具有抑制栓塞后炎癥反應(yīng)的作用，而IL-17A，VEGF及HIF-1可能參與了BAVM增長(zhǎng)及臨床病理過(guò)程。 第三章腦AVM易感基因在腦低灌注模型中表達(dá)的研究 目的：探討大鼠慢性腦低灌注(CCH)后的病理生理變化及相關(guān)分子生物學(xué)機(jī)制，為研究BAVM發(fā)生、發(fā)展機(jī)理及防治策略探索新的研究靶點(diǎn)及理論依據(jù)。 方法：在Yassari等CCH動(dòng)物模

12、型的基礎(chǔ)上進(jìn)行改進(jìn)，制作大鼠CCH模型；應(yīng)用激光多普勒血流探測(cè)儀(LDPI)，檢測(cè)大鼠CCH模型中AVF開(kāi)放后6W及其阻斷后1h、24h及72h腦皮層血流灌注的變化；應(yīng)用透視電鏡觀(guān)察大鼠CCH模型AVF開(kāi)放后6W及其阻斷后24h腦皮層組織的超微結(jié)構(gòu)改變；應(yīng)用免疫組化及qRT—PCR法，檢測(cè)大鼠CCH模型AVF開(kāi)放后6W及其阻斷后1h、24h及72h時(shí)，IL-17、VEGF、HIF-1及TGF—β在腦組織中的表達(dá)。 結(jié)果：大鼠CC

13、H模型建立6W后AVF側(cè)腦血流較對(duì)側(cè)下降約31.68％，AVF阻斷后24h腦皮層血流有所恢復(fù)，72h仍未達(dá)到基線(xiàn)水平；透射電鏡下可觀(guān)察到CCH后6W大鼠腦皮層神經(jīng)元皺縮、小血管周?chē)阃粶p少、血管內(nèi)皮細(xì)胞空泡化，周細(xì)胞胞漿水腫及線(xiàn)粒體腫脹、神經(jīng)細(xì)胞凋亡等改變。AVF阻斷后24h電鏡下可見(jiàn)到小血管周?chē)[、血管內(nèi)皮細(xì)胞連接增寬、神經(jīng)細(xì)胞及膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)線(xiàn)粒體腫脹等超微結(jié)構(gòu)變化，說(shuō)明該模型能夠模擬BAVM的慢性盜血過(guò)程，以及治療后再灌注的部分病理

14、生理特征；與對(duì)照組問(wèn)比較，大鼠CCH模型中AVF開(kāi)放后6W及其阻斷后不同時(shí)間IL-17A、VEGF、TGF—β及HIF-1基因表達(dá)的差異有顯著性(P<0.05)，其中IL-17A在AVF阻斷后1h表達(dá)增高，24h達(dá)高峰(P<0.05)；HIF-1在對(duì)照組有微弱表達(dá)，在CCH后6W及AVF阻斷后不同時(shí)間點(diǎn)表達(dá)逐漸升高(P<0.05)；VEGF在CCH建立后及AVF阻斷后表達(dá)增高(P<0.05)，提示CCH后血管增殖活性增強(qiáng)；TGF—β在對(duì)