舌癌耐藥相關(guān)基因(TCRP1)特異性介導(dǎo)鉑類抗癌藥物耐愛(ài)的進(jìn)一步研究.pdf

1、背景與目的:
　　 舌癌耐藥相關(guān)基因（TCRP1）是本課題組從舌癌多藥耐藥細(xì)胞系Tca8113/PYM自主克隆的新基因。前期的體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)TCRP1基因受控于轉(zhuǎn)錄因子c-MYC，并經(jīng)AKT/NF-KB等抗凋亡途徑特異性介導(dǎo)舌癌細(xì)胞順鉑耐藥和放療耐受;同時(shí)TCRP1不僅在舌癌組織中高表達(dá)，在肺癌，卵巢癌，乳腺癌等多種組織的表達(dá)也高于其相應(yīng)的正常組織，提示TCRP1基因可能參與多種腫瘤的鉑類藥物化療耐受。為證實(shí)這一假設(shè)，本研究擬檢

2、測(cè)TCRP1表達(dá)與上述腫瘤繼發(fā)性鉑類藥物抗性的關(guān)系，并在一系列肺癌細(xì)胞系中觀測(cè)TCRP1基因表達(dá)與原發(fā)性鉑類抗癌藥物耐受的關(guān)系。為明確TCRP1基因特異性介導(dǎo)鉑類抗癌藥物耐受的標(biāo)志物作用，開(kāi)展以TCRP1為靶標(biāo)的化療耐受預(yù)測(cè)和干預(yù)提供進(jìn)一步證據(jù)。
　　 方法:
　　 (1)以順鉑耐受的舌癌細(xì)胞系(Tca8113/PYM)為陽(yáng)性對(duì)照，順鉑敏感的乳腺癌細(xì)胞系(MCF-7/5-FU)為陰性對(duì)照，QPCR, WesternBlo

3、t和MTS檢測(cè)卵巢癌細(xì)胞（COC1和COC1/DDP）、肺癌細(xì)胞(A549和A549/DDP) TCRP1基因的表達(dá)與鉑類藥物（順鉑cDDP和奧沙利鉑L-OHP）敏感性的關(guān)系。
　　 (2) MTS篩選8種不同類型肺癌細(xì)胞系對(duì)順鉑的藥物敏感性，QPCR和Western Blot檢測(cè)這些細(xì)胞中TCRP1基因的表達(dá)，分析TCRP1基因表達(dá)與原發(fā)性耐藥的相關(guān)性。
　　 (3) si-RNA干擾以上獲得性及先天性耐藥株細(xì)胞TCR

4、P1和c-MYC基因;Bay11-7082抑制細(xì)胞NF-κB活性，MTS和Western Blot檢測(cè)處理后鉑類藥物敏感性及其相關(guān)信號(hào)分子的改變，進(jìn)一步闡述c-MYC對(duì)TCRP1的表達(dá)調(diào)控及TCRP1介導(dǎo)鉑類藥物耐藥的分子機(jī)制。
　　 結(jié)果:
　　 (1) TCRP1基因在COC1/DDP，A549/DDP和Tca8113/PYM的表達(dá)明顯高于各自的親代細(xì)胞，在MCF-7/5-FU中TCRP1的表達(dá)與親代細(xì)胞無(wú)明顯差異;

5、TCRP1高表達(dá)細(xì)胞株對(duì)鉑類藥物（cDDP和L-OHP）的藥物敏感性明顯低于低表達(dá)細(xì)胞。兩者存在正相關(guān)關(guān)系(rcDDp=0.67,rL-OHp=0.83;p＜0.05)。
　　 (2)8種肺癌細(xì)胞系中TCRP1基因的表達(dá)與順鉑的耐藥性呈現(xiàn)正相關(guān)(r=0.68; p＜0.05)。其中TCRP1基因表達(dá)最高的95D細(xì)胞比表達(dá)量最低的H1299細(xì)胞對(duì)cDDP和L-OHP的耐藥性分別增加5.5、5.6倍。
　　 (3)干擾獲得性

6、耐藥株(COC1/DDP，A549/DDP和Tca8113/PYM)及先天性耐藥株95D細(xì)胞TCRP1，c-MYC，及抑制NF-κB都能一定程度逆轉(zhuǎn)c-MYC正性調(diào)控的TCRP1通過(guò)AKT/NF-κB/Bcl-2介導(dǎo)的鉑類化療耐受。
　　 結(jié)論:
　　 (1) TCRP1基因不僅介導(dǎo)舌癌細(xì)胞的化療耐受，也介導(dǎo)肺癌，卵巢癌等多種腫瘤的化療耐受;
　　 (2) TCRP1基因不僅介導(dǎo)腫瘤化療的繼發(fā)性耐受，也介導(dǎo)其原發(fā)