FLIP干擾性小RNA阻斷大腸癌細(xì)胞免疫逃逸的體外實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:大腸癌是胃腸道最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一,目前各種治療方法均不能有效地防止其轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā),其中最主要的原因是腫瘤組織的凋亡水平下調(diào),從而逃避機(jī)體的免疫監(jiān)視,免遭免疫系統(tǒng)的殺傷和攻擊.因此進(jìn)一步闡釋腫瘤的免疫逃逸機(jī)制,尋找新的治療靶點(diǎn),已成為當(dāng)今國(guó)內(nèi)外腫瘤治療的研究熱點(diǎn).該論文聚焦于Fas受體凋亡途徑中的抑制蛋白——FLIP,采用RNA干擾技術(shù),比較干擾前后體外培養(yǎng)的大腸癌細(xì)胞株凋亡敏感性的變化,闡明在大腸癌中是否存在由FLIP介導(dǎo)的免疫逃

2、逸機(jī)制,并為腫瘤的基因治療提供新的思路.方法:體外培養(yǎng)大腸癌細(xì)胞株,采用直接免疫熒光流式細(xì)胞學(xué)技術(shù)和半定量RT-PCR法篩選體外實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?利用電穿孔,將干擾性小RNA(siRNA)片段轉(zhuǎn)染至HT-29細(xì)胞,以相對(duì)半定量PCR法計(jì)算干擾效率,確定FLIP基因被封阻情況.在激活型抗Fas抗體誘導(dǎo)下,采用Annexin V法和細(xì)胞周期分析共同判定轉(zhuǎn)染前后HT-29細(xì)胞凋亡敏感性的變化.結(jié)論:1.大腸癌細(xì)胞中存在一定水平的FLIP表達(dá),經(jīng)RNA

3、干擾后,FLIP mRNA表達(dá)水平下調(diào),細(xì)胞表面Fas受體表達(dá)水平未產(chǎn)生明顯變化,細(xì)胞對(duì)Fas介導(dǎo)的凋亡敏感性上升,從而證實(shí)在大腸癌中存在著由FLIP介導(dǎo)的免疫逃逸機(jī)制.2.隨著FLIP表達(dá)水平的下降,在激活型抗Fas抗體的刺激下,大腸癌細(xì)胞中凋亡細(xì)胞所占比例增加,提示FLIP作為受體凋亡通路的關(guān)鍵因子,可望成為腫瘤基因治療的新靶點(diǎn).3.將對(duì)應(yīng)目的基因FLIP的外源siRNA片段轉(zhuǎn)染入體外培養(yǎng)細(xì)胞后,高效、特異地降低了FLIP mRNA