斑馬魚血管中致動脈粥樣硬化脂質(zhì)的濃度極化現(xiàn)象.pdf

1、動脈粥樣硬化性心血管疾病在全球范圍內(nèi)的發(fā)病率和死亡率都居于領(lǐng)先地位。對于動脈粥樣硬化的發(fā)病機(jī)理，目前醫(yī)學(xué)界還沒有給出完整的解釋，但是已發(fā)現(xiàn)很多因素與動脈粥樣硬化的發(fā)生和發(fā)展有著密切的聯(lián)系。盡管這些因素都從不同的側(cè)面來解釋動脈粥樣硬化的發(fā)生，然而卻不能很好的解釋動脈粥樣硬化發(fā)病的局灶性，即動脈粥樣硬化總是發(fā)生在動脈的彎曲、分叉及狹窄等部位。研究表明，早期動脈粥樣硬化的發(fā)生，是由于膽固醇和其他脂質(zhì)在血管內(nèi)膜上的沉積。這些沉積的脂質(zhì)主要來源于

2、血漿中的脂蛋白，尤其是低密度脂蛋白。大量計(jì)算機(jī)模擬和體外實(shí)驗(yàn)表明脂蛋白的濃度極化是導(dǎo)致動脈粥樣硬化的主要原因，但是，到目前為止還未見在體的研究關(guān)于脂質(zhì)濃度極化的相關(guān)報(bào)道。斑馬魚具有胚胎透明、性成熟周期短、個體小易養(yǎng)殖等諸多特點(diǎn)，它的使用正逐漸拓展和深入到神經(jīng)系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)以及生殖系統(tǒng)的發(fā)育；功能和疾病的研究中。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用斑馬魚胚胎透明這一特點(diǎn)，將其運(yùn)用到脂質(zhì)濃度極化的在體研究中，從而可以在體的分析脂質(zhì)濃度極化與動脈粥樣硬化間

3、的關(guān)系。
　　在本課題中，使用轉(zhuǎn)基因斑馬魚系：Flk1:GFP，在其出生后第二天，通過心臟顯微注射技術(shù)將紅色熒光脂質(zhì)（Dil-LDL）注射在其血液循環(huán)中（總量n=60）。經(jīng)激光共聚焦顯微鏡跟蹤脂質(zhì)在血管中的流動、分布以及沉積情況。結(jié)果表明，與對照組相比較，脂質(zhì)注射后可以清楚的看到注射組（57/60）中紅色脂蛋白在血管中流動。表明通過心臟顯微注射可以將研究的脂質(zhì)注射到斑馬魚血液循環(huán)中，對其進(jìn)行可視化的觀察。
　　共聚焦顯微鏡拍

4、攝的圖像采用圖像處理軟件進(jìn)行熒光定量分析。結(jié)果表明：血液與血管壁界面的低密度脂蛋白濃度顯著高于血流中的本體濃度，即產(chǎn)生了脂質(zhì)的濃度極化分布。但是在血管的分叉位置，低密度脂蛋白在壁面的濃度又明顯的高于在血管平直段的壁面濃度，而其在血液中的本體濃度是均一的。
　　脂質(zhì)注射兩天后，采用激光共聚焦顯微鏡觀察，在斑馬魚的血管中出現(xiàn)了明顯的脂質(zhì)沉積，并且主要出現(xiàn)在血管的分叉和彎曲處，而這些部位有更加嚴(yán)重的脂質(zhì)濃度極化分布，這表明脂質(zhì)的濃度極化