轉(zhuǎn)基因克隆牛胎盤中的差異miRNAs和bta-miR-708慢病毒表達(dá)載體的構(gòu)建.pdf

1、胎盤缺陷與轉(zhuǎn)基因克隆牛的異常發(fā)育有關(guān)，但其具體機(jī)制目前還不清楚，而miRNAs在組織與器官發(fā)育過程中起著重要的調(diào)控作用。為了研究胎盤中miRNAs的差異表達(dá)是否與轉(zhuǎn)基因克隆牛效率低有關(guān)，我們運(yùn)用二代測(cè)序技術(shù)對(duì)四組胎盤組織：1）POL轉(zhuǎn)基因克隆胎盤，其后代出生后存活；2）POD轉(zhuǎn)基因克隆胎盤，其后代在出生后兩天內(nèi)死于大胎兒綜合癥；3）PCM轉(zhuǎn)基因克隆牛作為母牛自然妊娠后所生產(chǎn)小牛的胎盤；4）PNC一頭荷斯坦母牛經(jīng)自然繁殖后所產(chǎn)的小牛胎盤；

2、進(jìn)行了 miRNAs及 mRNAs測(cè)序分析，最后在差異表達(dá)mRNAs的基礎(chǔ)上，分析信號(hào)通路的變化。結(jié)果顯示在四組胎盤樣品中共有694差異表達(dá)的 miRNAs，如 miR-210，miR-155，miR-128，miR-183和 miR-145。信號(hào)通路分析結(jié)果顯示POL，POD，PCM組胎盤與PNC組胎盤相比顯著上調(diào)的通路主要包括黏著斑，ECM-受體相互作用通路，癌癥通路，肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架調(diào)控通路，內(nèi)吞作用通路，粘附連接通路；POL，P

3、OD，PCM組胎盤與 PNC組胎盤相比顯著下調(diào)的通路主要包括瘧疾，NOD樣受體信號(hào)通路，細(xì)胞因子與細(xì)胞因子受體通路，Jak-STAT信號(hào)通路和阿米巴原蟲癥。同時(shí)我們對(duì)其中差異表達(dá)顯著的 bta-miR-708，利用三質(zhì)粒包裝系統(tǒng)（PCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP， PMD2.G，PSPAX2）構(gòu)建其慢病毒表達(dá)載體，并將其慢病毒表達(dá)載體轉(zhuǎn)入牛胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞，通過熒光定量 PCR鑒定 miR-708的表達(dá)量。結(jié)果表明構(gòu)建的mi