脂多糖誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)高遷移族蛋白B1及羅格列酮干預(yù)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:研究1mg/L的脂多糖（lipopolysaacharides，LPS）誘導(dǎo)體外培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（human umbilical vein endothelial cells，HUVECs）表達(dá)高遷移族蛋白B1（high mobility group protein box1，HMGB1）的影響及羅格列酮的干預(yù)作用。 方法:取體外培養(yǎng)的第3-7代HUVECs進(jìn)行試驗(yàn)。 實(shí)驗(yàn)分組：（1）空白對(duì)照組。（2）LPS

2、組，用1mg/L的LPS分別作用HUVECs6、12、24h。（3）羅格列酮+LPS組：分別以羅格列酮0μmol/L、5μmol/L、10μmol/L、15μmol/L四個(gè)濃度預(yù)先作用2h，然后再分別以羅格列酮加1mg/L的LPS共作用6、12、24h。采用四唑鹽比色法（MTT法）檢測96孔板細(xì)胞的吸光值（OD），以評(píng)價(jià)LPS處理HUVECs及羅格列酮干預(yù)后的細(xì)胞增值活性。酶聯(lián)免疫分析法（ELISA）測定細(xì)胞培養(yǎng)液中HMGB1蛋白含量以

3、檢測HUVECs分泌HMGB1含量。用半定量RT-PCR分析LPS誘導(dǎo)HUVECs及羅格列酮干預(yù)后HMGB1mRNA在24h的表達(dá)變化。 結(jié)果:（1）MTT顯示1mg/L的LPS處理HUVECs后與對(duì)照組相比明顯降低細(xì)胞增殖活性（P<0.01）。羅格列酮預(yù)先作用2h后細(xì)胞增殖有所恢復(fù)，與LPS處理組比較有顯著差異性（P<0.01）；5μmol/L、10μmol/L、15μmol/L羅格列酮可濃度依賴性保護(hù)HUVECs增殖活性，并

4、呈時(shí)間依賴性（P<0.05，P<0.01）。 （2）正常人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞不分泌HMGB1。1mg/L的LPS能誘導(dǎo)HUVECs分泌HMGB1，LPS誘導(dǎo)HMGB1分泌呈時(shí)間依賴性，與6h比較，作用12h，24h時(shí)差異有顯著性（P<0.05，P<0.01）。0μmol/L羅格列酮對(duì)LPS誘導(dǎo)的HUVECs分泌HMGB1無影響（P>0.05）；5μmol/L羅格列酮抑制HMGB1分泌呈時(shí)間依賴性；5μmol/L、10μmol/L、1

5、5μmol/L羅格列酮呈濃度依賴性抑制LPS誘導(dǎo)HMGB1分泌（P<0.05，P<0.01）。 （3）正常內(nèi)皮細(xì)胞有少量HMGB1mRNA表達(dá)。LPS誘導(dǎo)HMGB1mRNA表達(dá)明顯增加，差異顯著性（P<0.01）。0μmol/L羅格列酮對(duì)LPS誘導(dǎo)HMGB1mRNA表達(dá)無影響（P>0.05）；5μmol/L、10μmol/L、15μmol/L羅格列酮呈濃度依賴性抑制LPS誘導(dǎo)的HMGB1mRNA表達(dá)（P<0.05，P<0.01）