豬Bic基因中Foxp3結(jié)合位點突變對miR-155表達影響探究.pdf

1、近年來抗病育種研究成為國內(nèi)外動物遺傳育種專家高度關注的領域。中國地方豬種是抗病選育中親本的重要來源，因此從遺傳角度分析中國地方豬種與外來豬種的免疫差異對解析中國地方豬種是否具有較強抗逆性和豬的抗病新品種培育等是十分必要的。miR-155在免疫系統(tǒng)發(fā)生發(fā)育及調(diào)控中扮演重要角色，其在不同豬種中差異表達可能引起整個免疫系統(tǒng)的差異。本研究旨在利用染色質(zhì)免疫共沉淀技術(shù)探索豬Bic基因中與Foxp3蛋白相結(jié)合的區(qū)域，利用雙熒光素酶報告系統(tǒng)分析已發(fā)現(xiàn)

2、的大白豬和梅山豬中Bic基因的一個A/C突變導致的相應序列與轉(zhuǎn)錄因子Foxp3的結(jié)合差異并在個體水平利用定量PCR對miR-155及其候選靶基因表達量進行檢測，之后對miR-155的候選靶基因進行雙熒光實驗驗證。我們得到的具體結(jié)果如下:
　　(1)在實驗室之前擴增得到的5個SNP的基礎上，在大白豬和梅山豬中擴增pre-miR-155前后約3kb左右的片段，通過測序得到20個疑似SNP的位點。
　　(2)初步確定豬中轉(zhuǎn)錄因子F

3、oxp3與pre-miR-155上游305bp左右的AAACA基序結(jié)合。
　　(3)由于SNP的存在不同豬種中的基序與Foxp3結(jié)合程度有差異，AAACC型片段的結(jié)合能力強于AAACA型片段，并且這種結(jié)合可能需要一定的條件，例如片段長度或基序數(shù)量。
　　(4)轉(zhuǎn)錄因子Foxp3與兩種單倍型豬的Bic基因的結(jié)合能力的差異影響miR-155的表達，使CC型個體中的miR-155-5p和miR-155-3p的表達水平均高于AA型個