TRPM8對肺動脈平滑肌張力的調控及其在肺高壓發(fā)病過程中的作用.pdf

1、目的：肺高壓（Pulmonary Hypertension，PH）病程中典型的血管病變多是由于肺血管平滑肌細胞（Pulmonary Arterial Smooth Muscle Cells，PASMCs）內Ca2+穩(wěn)態(tài)失衡所致。本研究分別采用野百合堿（Monocrotaline，MCT）一次性腹腔注射和慢性低氧（Chronic Hypoxia）持續(xù)誘導構建PH大鼠模型以模擬不同類型PH的發(fā)病特征，比較肺動脈（Pulmonary Arte

2、ries，PAs）上的TRPM8表達及功能在兩類PH發(fā)生過程中的異同，旨在為PH提供新的防治靶向。
　　方法：SD大鼠分別采用一次性腹腔注射（50mg/kg）MCT和慢性低氧兩種方式誘發(fā)PH，觀察項目：(1)PH模型鑒定：平均右心室內壓（mRVP）、右心室重量指數(shù)（RVMI）；(2)TRPM8的表達：real time RT-PCR分別檢測正常對照組（CON）大鼠和PH模型大鼠PAs上TRPM(1~8)mRNA的表達水平，從中找出

3、經MCT和慢性低氧預處理后表達量發(fā)生明顯改變的亞型，用western blot進一步對該蛋白的表達進行定量分析；(3)分別描繪TRPM8mRNA與血流動力學指標（mRVP、RVM I）改變的時間依賴性曲線，分析不同類型PH發(fā)生過程中TRPM8mRNA與mRVP的關系；(4)觀察大鼠離體PAs在不同濃度TRPM8激動劑薄荷醇（Menthol）作用下的張力改變。
　　結果：(1)相比CON組，MCT組和CH組大鼠mRVP及對應的RVM

4、I顯著升高（P<0.01），表明MCT和慢性低氧可以誘發(fā)大鼠PH和右心室肥厚；(2)大鼠PAs同時表達TRPM(1~8)，但MCT和慢性低氧預處理僅導致TRPM8 mRNA表達水平下調（P<0.01），下調后的TRPM8mRNA在MCT組上的表達量較CH組更低；western blot進一步證實PAs上的TRPM8蛋白在MCT組和CH組呈低表達（P<0.05）；(3)TRPM8 mRNA在慢性低氧1d后幅度最大并直接下調至最低，其表達量

5、在MCT預處理7d后開始下調，14d降至最低并維持至21d；與TRPM8下調相反，mRVP在PH發(fā)生過程中呈上調趨勢，但mRVP的升高均發(fā)生在TRPM8 mRNA下調之后，提示MCT和慢性低氧預處理先下調TRPM8 mRNA的表達，繼而引起mRVP升高，并逐漸誘發(fā)右心室代償性肥厚；(4)1~300μM Menthol能夠使CON組大鼠去內皮PAs的基礎張力呈濃度依賴性下調，也可以阻斷1μM苯腎上腺素（Phenylephedrine，PH

6、EN）介導的收縮效應，后者的量效曲線左移，說明Menthol給藥前的PAs張力水平決定了血管平滑肌的舒張程度；(5)1~300μM Menthol可以分別引起CON、MCT和CH組大鼠PAs基礎張力的下調，也能阻斷PHEN對三者的預收縮作用，與CON組相比，MCT預處理對Menthol介導的舒張效應影響不大，而慢性低氧能夠顯著增強Menthol介導的舒張效應，舒張曲線分別在1~300μM和10~100μM Menthol作用下發(fā)生左移。

7、
　　結論：TRP M8通道的激活可以明顯緩解血管平滑肌的高張力狀態(tài)，在不同類型PH發(fā)病過程中，TRPM8的下調可能是機體為適應PAs持續(xù)收縮而采取的抗損傷措施，PH發(fā)生過程中，適度 TRPM8表達量的下調可以減少Ca2+內流、緩解血管平滑肌的收縮，另一方面胞膜上適量的TRPM8可能通過與BKCa的偶聯(lián)作用可以引起平滑肌的舒張，因此在PH發(fā)病過程中適度調整PAs上 TRPM8的表達可以幫助維持[Ca2+]i的平衡，緩解肺動脈壓力的