大巖桐蠟質基因SsCER1的克隆及其功能分析.pdf

1、植物蠟質是對覆蓋于裸露在空氣中的植物組織的表皮脂質成分的一個集體稱呼，還包括地下的木栓質基質、愈傷組織、花粉粒以及種皮中的脂類。在植物角質層中，蠟質主要是由長鏈脂肪族脂質組成，不過也還包含一些三萜系化合物和小分子次生代謝產物，如固醇和類黃酮。植物角質層蠟質的物理和化學的組成決定的功能對于植物生命至關重要。它限制了非氣孔水分散失，保護植物抵御紫外線，并在抵御細菌和真菌病原體方面扮演著重要角色，還參與了昆蟲和植物之間多樣的相互作用常重要的。

2、近年來，經常通過研究植物外表皮蠟質的作用機理，并將外源的蠟質基因轉入植物體中，用以提高植物耐旱性。
　　本研究通過 RACE技術從大巖桐中克隆得到了一個新的蠟質基因，對其表達進行了鑒定。還構建了表達載體，并轉化煙草對起功能進行初步的分析，發(fā)現(xiàn)該基因確實通過改變蠟質結構，減少水份散失提高了植物的耐旱性，對培育新的耐旱植物具有指導意義。并構建了干涉載體，確定了大巖桐篩選壓，為進一步研究該基因功能打下了基礎。論文的主要研究成果如下：

3、r>　?。?）通過RACE技術從大巖桐中克隆得到一個新的蠟質基因并命名為SsCER1，該基因全長為2160bp。生物信息學分析表明其包含一個完整的ORF，長為1884bp，編碼了627個氨基酸，主要包含2個跨膜（transmembrane）結構域和一個醇去飽和（Sterol_desat）結構域，與蠟質基因中的CER1類基因結構域位置相似。核酸序列分析表明SsCER1與已知CER1類基因具有50％以上的同源性。蛋白質同源性分析也表明其與C

4、ER1類基因具有進化上相近的關系。
　?。?）利用RT-PCR和Northern對該基因的表達進行了分析，發(fā)現(xiàn)SsCER1基因在大巖桐的根、莖、葉、花、大花芽和幼花芽中均有表達。結合蠟質基因應該表達的部位，初步說明SsCER1基因屬于蠟質基因。
　?。?）成功構建了植物表達載體pBI121-CER1和干涉載體pZh01CER1，并對大巖桐Kan和Hym篩選壓進行了鑒定，Kan和Hym篩選壓分別為50mg/L和10mg/L。為