健脾益肺口服液對慢阻肺“肺脾氣虛證”大鼠免疫功能及氣道炎癥的影響.pdf

1、[目的]：
　　 探明健脾益肺口服液對慢性阻塞性肺疾病穩(wěn)定期大鼠免疫功能、氣道炎癥的影響，求證健脾益肺口服液是否通過NF-κB信號(hào)傳導(dǎo)途徑來調(diào)節(jié)慢阻肺大鼠免疫功能及抑制其氣道炎癥，為健脾益肺口服液臨床治療慢阻肺病人提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，從而進(jìn)一步論證將“健脾益肺法”作為慢阻肺穩(wěn)定期中醫(yī)藥治療手段的可行性和重要性；深入理解“肺脾氣虛”這一慢阻肺穩(wěn)定期中醫(yī)證型和客觀指標(biāo)“免疫功能低下”及“氣道炎癥指標(biāo)”等的相關(guān)性，加深對慢阻肺穩(wěn)定期肺脾氣虛

2、證本質(zhì)的認(rèn)識(shí)，促進(jìn)中醫(yī)證型客觀化，對指導(dǎo)中醫(yī)藥治療慢阻肺穩(wěn)定期的基礎(chǔ)研究具有重要意義。
　　 [方法]：
　　 1．理論探討方面：對慢阻肺中醫(yī)病機(jī)進(jìn)行深入探討；深入分析健脾益肺法治療慢阻肺的依據(jù)；探析健脾益肺口服液的方義，分析其用于調(diào)節(jié)慢阻肺免疫功能、抑制氣道炎癥的可行性。
　　 2．實(shí)驗(yàn)研究方面：將65只SD成年雄性大鼠隨機(jī)分為6組，空白對照組10只、其余各組每組11只，分別為模型組、健脾益肺口服液高、中、低劑

3、量組及地塞米松陽性藥對照組；用香煙煙熏加脂多糖復(fù)合因素復(fù)制慢阻肺“肺氣虛證”動(dòng)物模型，然后用大黃煎液灌胃復(fù)制“脾氣虛證”模型：造模28天結(jié)束，在14天開始按照實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)給藥，28天后測定指標(biāo)；觀察各組大鼠整體情況、HE染色后觀察各組基本病理變化：MASSON染色后觀察各組膠原含量、平滑肌厚度等；應(yīng)用圖像分析系統(tǒng)測定支氣管平滑肌厚度、氣管內(nèi)徑等，計(jì)算支氣管平滑肌指數(shù)、膠原纖維面積；取動(dòng)脈血，抗凝后用動(dòng)脈血?dú)夥治鰞x測定大鼠PaCO2、PaO2

4、、PH及SaO2等動(dòng)脈血?dú)庵笜?biāo)；取血后剝離大鼠胸腺、脾臟，根據(jù)體質(zhì)量計(jì)算大鼠胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)；麻醉后取血，抗凝后用流式細(xì)胞儀測定血液中CD3+、CD4+、CD8+的表達(dá)率，并計(jì)算CD4+/CD8+比值；部分血液離心后取血清，用ELISA試劑盒測定IgG、IgA、IgM水平及IL-8、TNF-α活性；取大鼠肺部組織，液氮速凍研磨用trizol提取組織mRNA，逆轉(zhuǎn)錄后，設(shè)計(jì)引物進(jìn)行real-timePCR擴(kuò)增，以內(nèi)參為對照，觀察各組肺組

5、織IL-8、TNF-αmRNA的基因表達(dá)；肺部組織用試劑盒提取組織蛋白質(zhì)，利用蛋白印跡(WB，Westernblotting)方法，測定各組肺組織NF-κB和I-κB的表達(dá)。
　　 [結(jié)果]：
　　 1．通過對動(dòng)物模型的整體觀察及肺組織病理學(xué)結(jié)果，證實(shí)了慢阻肺“肺脾氣虛證”動(dòng)物模型的復(fù)制是成功的，從而為實(shí)驗(yàn)的順利進(jìn)行提供了依據(jù)；
　　 2．健脾益肺口服液能顯著改善慢阻肺實(shí)驗(yàn)大鼠的整體情況，如咳嗽、體重、精神狀態(tài)等

6、；
　　 3．健脾益肺口服液能顯著抑制大鼠氣道炎癥，降低膠原含量、膠原纖維面積、支氣管平滑肌指數(shù)，改善氣道重塑，作用類似于或優(yōu)于地塞米松，以高、中劑量組為佳；
　　 4．健脾益肺口服液能改善大鼠缺氧狀態(tài)，由此提高大鼠的存活率，改善生存質(zhì)量，但對PCO2、PH無明顯改善作用；
　　 5．健脾益肺口服液能顯著提高慢阻肺大鼠細(xì)胞及體液免疫功能，降低其急性發(fā)作次數(shù)；
　　 6．健脾益肺口服液能抑制IL-8、TNF

7、-α炎性標(biāo)志物的濃度及IL-8、TNF-αmRNA在肺組織的表達(dá)，療效以高、中劑量組為佳；
　　 7．健脾益肺口服可增加慢阻肺大鼠體質(zhì)量、胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)，提高機(jī)體免疫力，增強(qiáng)防病抗病能力；
　　 8．健脾益肺口服液可降低NF-κB在肺組織的表達(dá)，提高了I-κB的表達(dá)。而NF-κB信號(hào)傳導(dǎo)途徑在慢阻肺氣道炎癥反應(yīng)、免疫調(diào)節(jié)中起著重要作用，本實(shí)驗(yàn)健脾益肺口服液提高了免疫功能、抑制了氣道炎癥，同時(shí)下調(diào)NF-KB在肺組織的表

8、達(dá)，上調(diào)I-κB的表達(dá)，故推測健脾益肺口服液可能通過NF-κB信號(hào)傳導(dǎo)途徑調(diào)節(jié)COPD免疫功能、抑制氣道炎癥。
　　 [結(jié)論]：
　　 1．肺脾氣虛直接關(guān)系到慢阻肺的發(fā)生、發(fā)展，為慢阻肺穩(wěn)定期的病機(jī)關(guān)鍵。從“肺脾氣虛證”的病機(jī)出發(fā)，立法健脾益肺，通過健脾而達(dá)到補(bǔ)益肺氣的目的。
　　 2．健脾益肺口服液能增強(qiáng)慢阻肺實(shí)驗(yàn)大鼠免疫功能、抑制其氣道炎癥，改善氣道重塑，且一般以高、中劑量組為佳，對部分指標(biāo)的療效呈劑量依賴性

9、；其機(jī)制可能為通過NF-κB信號(hào)傳導(dǎo)途徑抑制慢阻肺大鼠氣道炎癥、調(diào)控其免疫功能；并有可能通過下調(diào)炎癥因子調(diào)節(jié)慢阻肺免疫功能。
　　 3．慢阻肺“肺脾氣虛證”病證結(jié)合動(dòng)物模型的成功復(fù)制使研究更有針對性，在中醫(yī)基礎(chǔ)研究與臨床研究之間架起了橋梁，有助于中醫(yī)藥作用機(jī)制的研究，且對于深層次探討中西醫(yī)理論的內(nèi)在聯(lián)系有重要意義。
　　 4．本研究加深了對慢阻肺穩(wěn)定期“肺脾氣虛證”本質(zhì)的認(rèn)識(shí)，在促進(jìn)中醫(yī)藥療效機(jī)制的闡明及中藥新藥的研發(fā)中