2種中藥--五倍子和黃連的抗群體感應(yīng)與抗病原菌作用的研究.pdf

1、群體感應(yīng)(QS)或細(xì)菌之間的信息交流是細(xì)菌根據(jù)細(xì)胞密度進(jìn)行自我協(xié)調(diào)的一種反應(yīng),是通過一種被稱作自誘導(dǎo)劑的激素樣物質(zhì)介導(dǎo)進(jìn)行的?；虮磉_(dá)調(diào)控系統(tǒng)依賴于QS,控制著多種原核表型?？紤]到QS系統(tǒng)也控制著多種有害的細(xì)菌表型,包括生物膜的形成、致病因子的表達(dá)、運(yùn)動(dòng)黏附性,因此抑制QS被視為一種抗菌治療的新方法。本論文對(duì)傳統(tǒng)中藥植物中的群體感應(yīng)抑制劑(QSI)進(jìn)行了探索性研究。
　　 用紫色色桿菌(chromobacterium viola

2、ceum)和根癌農(nóng)根菌(Agrobacteriumtumefaciens)兩種菌株為報(bào)告菌,從29種植物中篩選具有抗QS活性的植物。發(fā)現(xiàn)五倍子和黃連兩種植物顯示了對(duì)QS的抑制活性。這2種植物對(duì)紫色色桿菌有強(qiáng)烈的QSI活性,且在一定劑量組中抑制紫色色桿菌CV026菌株產(chǎn)生紫色菌素。對(duì)于根癌農(nóng)根菌A136,黃連不影響其QS介導(dǎo)的β-半乳糖苷酶的表達(dá),其QSI的活性范圍狹窄,而五倍子則有很強(qiáng)的活性。
　　 以銅綠假單胞菌(Pseudo

3、monas aeruginosa)和大腸桿菌(Escherichia cold為報(bào)告菌株,進(jìn)一步檢驗(yàn)了這些植物對(duì)QS調(diào)控的致病因子(模型菌株的群體運(yùn)動(dòng)能力和生物膜形成)的影響作用。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)一定劑量級(jí)別下,五倍子和黃連會(huì)明顯抑制銅綠假單胞菌PAO1和大腸桿菌的群體運(yùn)動(dòng)能力。100μg/mL濃度的提取物,五倍子分別抑制PAO1和大腸桿菌群體運(yùn)動(dòng)力的84％和190％,而黃連分別抑制73％和63％。200μg/mL時(shí),黃連和五倍子分別使PAO1

4、的生物膜厚度減少了37％和23％。
　　 此外,優(yōu)化了無細(xì)胞裂解液系統(tǒng),并首次將其應(yīng)用到QSI活性篩選過程,將活性篩選過程將原來的16-18h降低到1到2h,建立了QSI快速選擇系統(tǒng)。
　　 采用反相高效液相色譜法與新建立的QSI快速選擇系統(tǒng)聯(lián)用技術(shù)進(jìn)行鑒定,首次發(fā)現(xiàn)五沒食子酰葡萄糖(Pentagalloylglucose)是五倍子中的QSI活性物質(zhì)之一。該物質(zhì)作為五倍子鞣酸(gallotanin)的前體物質(zhì),在抑制綠膿

5、桿菌PAO1群體運(yùn)動(dòng)力方面,表現(xiàn)了與五倍子相同的抗菌活性。5μg/mL、10μg/mL和25μg/mL濃度的五沒食子酰葡萄糖存在的條件下培養(yǎng)PAO1,致病因子綠膿菌素,色素產(chǎn)量被強(qiáng)烈抑制了,分別降低了27.95％、42.25％和58.53％。
　　 本研究從具有抗菌活性的傳統(tǒng)中藥中發(fā)現(xiàn)兩種抗群體感應(yīng)的中藥,具有靶向QS系統(tǒng),而不是殺死細(xì)菌,為解決抗生素耐藥性問題提供一種方案。這一研究結(jié)果可能會(huì)為傳統(tǒng)中藥活性機(jī)理研究開辟出一個(gè)新領(lǐng)