三七總皂苷對內毒素休克大鼠心肌保護作用機制的研究.pdf

1、感染性休克是常見危急重癥，其病死率高達50％-60％以上。革蘭陰性菌感染是常見原因，LPS在休克的發(fā)生和維持中扮演重要角色。休克發(fā)生后，細菌可以通過抗菌素殺滅，但殺滅后細菌裂解釋放LPS，LPS與LBP結合后，被呈遞給細胞表面CD14受體，通過糖基-磷脂酰肌醇定位于細胞表面上，但CD14缺乏跨膜及細胞內結構域，不能將信號傳遞到細胞內，只能通過結合跨膜信號傳導蛋白發(fā)揮作用。TLR即是關鍵的跨膜信號傳導蛋白，而TLR4是人類TLR的同源變體

2、，它存在于單核細胞、中性粒細胞、心肌細胞、血管內皮細胞、成纖維細胞，是參與天然免疫的關鍵受體。在MD2的參與下，LPS-CD14與TLR4結合，將信息傳遞到胞內，TLR4胞內區(qū)與蛋白-MyD88結合使MyD88活化，活化的MyD88結合于IRAK，并使后者活化，活化的IRAK結合于TRAF6可使TAK1活化，相繼使NIK、I-kB活化，從而使I-kB與NF-kB分離，激發(fā)基因轉錄，使TNF-a合成釋放增加，然后誘導其它炎癥因子(如IL-

3、1、IL-6等)釋放，導致細胞線粒體、溶酶體損傷，微循環(huán)衰竭，進而引起心、肺、肝、腎、腸道等多器官功能損害，其中心肌受損引起心功能損害是導致休克的重要因素。eTnI是心肌細胞特有的結構蛋白，是反應感染性休克時心肌細胞受損的可靠指標，具有高度敏感性和特異性。 中醫(yī)認為，內毒素休克相當于厥脫證。由于感受外邪，內陷營血，耗傷氣血，致熱、毒、瘀互結，致臟腑功能衰竭，陰陽離決，陽氣外脫，解毒活血為其主要治法。 三七具有活血散瘀止血

4、、止血不留瘀、解毒消腫作用?，F(xiàn)代研究表明，三七主要成分為三七總皂苷，其中人參皂苷Rb1具有抗炎、止痛作用，人參皂苷Rg1和三七皂苷R1具有抗血小板聚集、抗血栓形成作用。動物實驗發(fā)現(xiàn)三七總皂苷對內毒素休克大鼠心肌具有保護作用，深入探討其作用機理具有重要臨床意義。 本研究分為整體動物實驗和細胞培養(yǎng)實驗兩部分： 1．整體動物實驗部分 1.1 目的：觀察三七總皂苷抗內毒素休克的療效，并初步探討其抗內毒素休克的機制。

5、 1.2方法：將SD大鼠隨機分為生理鹽水組、內毒素組、三七總皂苷小劑量組、三七總皂苷大劑量組、燈盞細辛組、?；撬峤M，相關藥物處理3天后復制內毒素休克模型，觀察動物平均動脈壓、心率、左室收縮壓，檢測血清cTnI、血清及心肌組織TNF-a、及應用RT-PCR檢測心肌組織TIR4mRNA表達。 1.3 結果：三七總皂苷1)可以明顯改善內毒素休克大鼠左室收縮壓，對穩(wěn)定血壓及心率具有重要作用，可延緩休克的發(fā)生。2)可以明顯降低內毒素休克

6、大鼠血清cTnI含量。3)抑制心肌TLR4mRNA表達，從而抑制血清及心肌TNF-a生成。 1.4 結論：三七總皂苷通過心肌組織TLR4mRNA表達，進而抑制血清及心肌組織TNF-α生成，減輕心肌細胞損傷，達到穩(wěn)定血壓及心率，改善心功能作用。 2. 體外實驗部分 2.1 目的：觀察三七總皂苷血清對內毒素誘導心肌細胞損傷的影響，初步探討其可能的機制。 2.2 方法：制備三七總皂苷等藥物血清，并進行心肌細胞培

7、養(yǎng)。將培養(yǎng)的乳鼠心肌細胞分為6組，對照組加入制備的lO％生理鹽水動物血清，其余5組分別加入10％生理鹽水、三七總皂苷小劑量、三七總皂苷大劑量、燈盞細辛、?；撬釀游镅澹囵B(yǎng)48h后再予內毒素刺激，用MTT法觀察他們對心肌細胞增值的影響。應用免疫組化檢測上述動物血清對內毒素刺激后心肌細胞TNF-α、TLR4蛋白表達的影響。 2.3 結果：三七總皂苷藥物血清1)可明顯抑制內毒素誘導心肌細胞損傷；2)抑制內毒素刺激后心肌細胞TNF-α