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1、為篩選具有更佳性能的納米粒載體材料,本課題對(duì)天然可生物降解高分子材料--殼聚糖進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾,以修飾產(chǎn)物殼聚糖季銨鹽(CSTM)、殼聚糖季銨鹽-g-聚乙二醇-葉酸(CSTM-g-PEG-FA/pDNA)為材料制備了載基因納米粒和CSTM/TPP-SPIO MR分子探針并對(duì)其特性進(jìn)行了系列研究。
本課題第一部分完成了殼聚糖季銨鹽和殼聚糖季銨鹽-g-聚乙二醇-葉酸納米材料的制備。首先將殼聚糖與甲基丙烯酰氧乙基三甲基氯化銨反應(yīng),將
2、殼聚糖修飾成可溶性殼聚糖季銨鹽,然后在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步用葉酸和PEG來(lái)修飾殼聚糖季銨鹽得到CSTM-g-PEG-FA。用IR和1H-NMR對(duì)聚合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定,TM和PEG-FA的特征峰明顯。
本課題第二部分進(jìn)行了殼聚糖季銨鹽-g-聚乙二醇-葉酸載基因納米粒的制備及形態(tài)學(xué)表征。首先采用自組裝法制備了CSTM/pDNA納米復(fù)合物和CSTM-g-PEG-FA/pDNA納米復(fù)合物,然后通過(guò)不同介質(zhì)溶液、有無(wú)血清、不同N/P等因素對(duì)
3、兩納米復(fù)合物的粒徑和zeta電位分別進(jìn)行考察,實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明在水溶液中能夠得到粒徑在200nm以內(nèi)、粒徑分布均勻、形態(tài)圓整、zeta電位高的納米復(fù)合物。凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),當(dāng)聚合物/pNDA的N/P大于等于5時(shí),兩種納米復(fù)合物都能完全包裹pNDA,而且兩種殼聚糖衍生物都能很好保護(hù)pNDA不受酶降解。
本課題第三部分從細(xì)胞毒性和轉(zhuǎn)染效率兩個(gè)方面進(jìn)行了兩種納米復(fù)合物的體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)。選擇葉酸受體高表達(dá)的293T細(xì)胞株,通過(guò)MTT比
4、色法測(cè)定兩種殼聚糖衍生物以及兩種納米制劑的細(xì)胞毒性,結(jié)果顯示無(wú)論是兩種殼聚糖衍生物還是兩種納米制劑的細(xì)胞存活率均在70%以上,說(shuō)明合成的CSTM和CSTM-g-PEG-FA材料具有良好的安全性。在細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)中,CSTM/pDNA納米粒和CSTM-g-PEG-FA/pDNA納米粒都有較高的轉(zhuǎn)染效率,且CSTM-g-PEG-FA/pDNA納米粒的轉(zhuǎn)染效率要高于CSTM/pDNA納米粒,證明CSTM-g-PEG-FA/pDNA納米粒具有一定
5、的細(xì)胞靶向性。
本課題第四部分制備了CSTM/TPP-SPIO分子探針。采用凝聚法制備CSTM/TPP空白納米粒,然后與SPIO結(jié)合生成CSTM/TPP-SPIO分子探針。CSTM/TPP-SPIO分子探針的粒徑在200~280nm之間,zeta電位在10.0~16.0mv之間。SPIO的包封率在80%以上。
本課題第五部分進(jìn)行了CSTM/TPP-SPIO分子探針的體外毒性實(shí)驗(yàn)和動(dòng)物體內(nèi)淋巴結(jié)病變定性診斷實(shí)驗(yàn)
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