被動(dòng)吸煙對(duì)實(shí)驗(yàn)性牙周炎大鼠牙周組織的影響及槲皮素的保護(hù)作用.pdf

1、目的:通過(guò)大鼠牙周結(jié)扎、被動(dòng)吸煙和槲皮素灌喂8周，建立牙周炎和被動(dòng)吸煙牙周炎及槲皮素干預(yù)大鼠模型。對(duì)比觀察大鼠牙周組織形態(tài)學(xué)變化，檢測(cè)大鼠牙周組織中腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、環(huán)氧化酶-2(COX-2)含量。探討被動(dòng)吸煙對(duì)牙周炎大鼠牙周組織的影響，槲皮素對(duì)牙周炎及被動(dòng)吸煙牙周炎大鼠牙周組織的保護(hù)作用。
　　方法:選用60只體重300g左右的6月齡健康雄性Wistar大鼠，隨機(jī)分為六組:正常對(duì)照組（N組），被動(dòng)吸煙組（P組），單

2、純結(jié)扎組(L組)，被動(dòng)吸煙結(jié)扎組（LP組），單純結(jié)扎+槲皮素組(LQ組)，被動(dòng)吸煙結(jié)扎+槲皮素組（LPQ組），每組10只。正常組不加干預(yù)措施，正常喂養(yǎng)。L組、LQ組、LP組、LPQ組大鼠給予全身麻醉，以直徑0.20mm的正畸鋼絲結(jié)扎雙側(cè)上頜第一磨牙牙頸部。LQ組，LPQ組大鼠給予槲皮素50mg/kg灌喂。LPQ組并于灌喂60min后采用密閉空間內(nèi)熏煙的方法進(jìn)行被動(dòng)吸煙的干預(yù)，每次60min，每次10只香煙。P組，LP組進(jìn)行相同的被動(dòng)吸煙

3、處理。給藥和被動(dòng)吸煙8周后，處死各組大鼠，保留上頜骨，立即放入10％甲醛溶液固定48小時(shí)，然后經(jīng)10％EDTA溶液脫鈣8周，制作牙體牙周組織連續(xù)切片。各組切片行HE染色，光鏡下觀察牙周組織的形態(tài)學(xué)變化，并采用免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)各組牙周組織中TNF-α、COX-2的水平變化，作統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　結(jié)果:
　　1牙周炎大鼠模型的建立:
　　單純結(jié)扎組大鼠上頜第一磨牙肉眼觀察:結(jié)扎8周，牙齦紅腫，觸及出血，牙周袋形成。牙體

4、牙周組織切片鏡下觀察:結(jié)扎8周，結(jié)合上皮向根方增殖，形成淺牙周袋;溝內(nèi)上皮和結(jié)合上皮下結(jié)締組織內(nèi)可見(jiàn)淋巴細(xì)胞等炎細(xì)胞浸潤(rùn);牙齦與牙周膜纖維溶解、排列紊亂;牙槽骨吸收，表面呈蠶食狀，可見(jiàn)破骨細(xì)胞。說(shuō)明實(shí)驗(yàn)性牙周炎大鼠模型成功建立。
　　2實(shí)驗(yàn)性牙周炎大鼠牙周組織病理學(xué)觀察:
　　正常組:牙齦乳頭形態(tài)基本完整，結(jié)合上皮位于釉牙骨質(zhì)界處，結(jié)締組織內(nèi)無(wú)明顯炎細(xì)胞浸潤(rùn)，牙周膜纖維排列整齊，牙槽嵴頂無(wú)吸收。
　　被動(dòng)吸煙組:牙齦乳

5、頭結(jié)構(gòu)不良，結(jié)合上皮附著于釉牙骨質(zhì)界處，溝內(nèi)上皮及結(jié)合上皮下有少量炎細(xì)胞浸潤(rùn)，牙槽嵴頂形態(tài)不規(guī)則。
　　單純結(jié)扎組:牙齦上皮釘突伸長(zhǎng)，結(jié)合上皮離開釉牙骨質(zhì)界，向根方增殖，形成牙周袋，結(jié)締組織內(nèi)見(jiàn)較多的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，牙周膜纖維排列紊亂，血管擴(kuò)張充血，牙槽骨吸收，牙槽嵴頂處可見(jiàn)破骨細(xì)胞。
　　被動(dòng)吸煙結(jié)扎組:牙齦乳頭形態(tài)破壞，結(jié)合上皮向根方增殖，形成較深的牙周袋，有的深達(dá)根尖1/3，結(jié)締組織內(nèi)見(jiàn)較多的淋巴細(xì)胞等炎細(xì)胞，牙槽骨吸收

6、明顯，可見(jiàn)明顯的吸收陷窩和破骨細(xì)胞。
　　結(jié)扎+槲皮素組:牙齦乳頭結(jié)構(gòu)破壞，結(jié)合上皮向根方增殖，形成牙周袋，結(jié)締組織內(nèi)見(jiàn)炎細(xì)胞浸潤(rùn)，牙槽骨內(nèi)見(jiàn)少量破骨細(xì)胞，較多成骨細(xì)胞，可見(jiàn)新生骨。
　　被動(dòng)吸煙結(jié)扎+槲皮素組:結(jié)合上皮向根方增殖，有牙周袋形成，結(jié)締組織內(nèi)見(jiàn)炎細(xì)胞浸潤(rùn)，牙槽骨內(nèi)見(jiàn)少量的骨吸收陷窩和破骨細(xì)胞，牙槽嵴頂見(jiàn)成骨細(xì)胞。
　　3實(shí)驗(yàn)大鼠牙周組織中TNF-α、COX-2的表達(dá)
　　3.1實(shí)驗(yàn)大鼠牙周組織中TN

7、F-α的的表達(dá):
　　TNF-α在牙周組織中主要表達(dá)于牙周膜成纖維細(xì)胞、破骨細(xì)胞及血管內(nèi)皮細(xì)胞中，陽(yáng)性染色為黃色或棕黃色顆粒。其六組的平均光密度值分別為:正常組:0.129±0.008;被動(dòng)吸煙組:0.142±0.011;單純結(jié)扎組:0.174±0.012;被動(dòng)吸煙結(jié)扎組:0.289±0.012;結(jié)扎+槲皮素組:0.154±0.009;被動(dòng)吸煙結(jié)扎+槲皮素組:0.196±0.003。
　　平均光密度值測(cè)定統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果:

8、>　　3.1.1單純結(jié)扎組、被動(dòng)吸煙結(jié)扎組高于正常組（P＜0.05）
　　3.1.2被動(dòng)吸煙組高于正常組（P＜0.05），被動(dòng)吸煙結(jié)扎組明顯高于單純結(jié)扎組（P＜0.05）
　　3.1.3結(jié)扎+槲皮素組低于單純結(jié)扎組（P＜0.05）
　　3.1.4被動(dòng)吸煙結(jié)扎+槲皮素組明顯低于被動(dòng)吸煙結(jié)扎組（P＜0.05）
　　3.2實(shí)驗(yàn)大鼠牙周組織中COX-2的表達(dá):
　　COX-2在牙周組織中主要位于牙周膜成纖維細(xì)胞、骨

9、細(xì)胞和成骨細(xì)胞中，陽(yáng)性染色為黃色或棕黃色顆粒。其六組的平均光密度值分別為:正常組:0.120±0.015;被動(dòng)吸煙組:0.136±0.014;單純結(jié)扎組:0.182±0.008;被動(dòng)吸煙結(jié)扎組:0.298±0.008;結(jié)扎+槲皮素組:0.143±0.002;被動(dòng)吸煙結(jié)扎+槲皮素組:0.205±0.006。
　　平均光密度值測(cè)定統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果:
　　3.2.1單純結(jié)扎組、被動(dòng)吸煙結(jié)扎組高于正常組（P＜0.05）
　　3.2

10、.2被動(dòng)吸煙組高于正常組（P＜0.05），被動(dòng)吸煙結(jié)扎組明顯高于單純結(jié)扎組（P＜0.05）
　　3.2.3結(jié)扎+槲皮素組低于單純結(jié)扎組（P＜0.05）
　　3.2.4被動(dòng)吸煙結(jié)扎+槲皮素組明顯低于被動(dòng)吸煙結(jié)扎組（P＜0.05）
　　結(jié)論:
　　1.正畸鋼絲結(jié)扎大鼠上頜第一磨牙及吸煙箱給予大鼠被動(dòng)吸煙成功建立大鼠牙周炎及被動(dòng)吸煙牙周炎模型。
　　2.被動(dòng)吸煙組比正常組牙周組織中炎細(xì)胞增多，TNF-α、COX-