構巢曲霉中Calcineurin及其相關蛋白對逆境響應及形態(tài)建成調控機制的研究.pdf

1、構巢曲霉(Aspergillus nidulans)是屬于子囊菌門(Ascomycota)的一種絲狀真菌，其菌絲延伸是所有極性生長中速率最快的模式生物之一，因此是研究決定曲霉侵染性的極性生長和相關信號通路的良好模式生物。
　　已有研究表明鈣離子信號通路參與調節(jié)構巢曲霉的極性生長和形態(tài)建成，然而關于鈣離子信號通路的核心調節(jié)者calcineurin在調節(jié)構巢曲霉極性生長和形態(tài)建成方面的作用的認識還很有限。本課題組之前的研究表明，在構巢

2、曲霉中，NDR(nuclear Dbf2-related)信號通路的成員MobB和CotA在細胞極性的建立和維持過程中形成復合體發(fā)揮功能，它們之中任何一個缺失，都能夠導致菌絲極性生長的缺失和形態(tài)缺陷。進一步研究表明，這種極性缺陷滲透逆境條件下可以恢復，然而這種逆境恢復過程依賴鈣信號通路。
　　在本文中，通過遺傳學及分子生物學方法我們進一步證明：(1)鈣離子信號系統(tǒng)成員的基因表達水平及蛋白表達水平在在CotA/MobB缺陷菌株在滲透

3、逆境中恢復極性生長的過程表達量增高，說明鈣離子信號通路確實參與了逆境恢復的過程。其中鈣調磷酸酶calcineurin的作用尤其重要。不僅參與了逆境恢復過程的轉錄調控，還能夠調控NDR通路中的CotA/MobB基因的表達量。(2)Calcineurin對基因表達的了解作用不僅僅是通過CrzA來完成的，即在逆境響應過程中，CrzA不是calcineurin唯一的下游靶蛋白。(3)通過同源比對找到構巢曲霉中預測的calcineurin相互作用

4、蛋白CdaA、FapA和AkrA：CdaA具有多糖去乙?；肝稽c，并具有N端信號肽及calcineurin結合位點，CdaA缺陷菌株對EGTA、Ca2+、NaCl和LiCl都沒有明顯的敏感性，但是CdaA/CnaA雙缺菌株在Ca2+產孢量相對于CnaA單缺菌株來說具有明顯的恢復；FapA具有NF-X1鋅指結構，并具有DNA結合序列和N端信號肽，RT-PCR結果顯示，FapA確實對鈣離子信號通路各組分基因表達具有調節(jié)作用，說明FapA為N

5、F-X1轉錄因子家族成員，FapA缺失菌株相對于野生型來說，對EGTA敏感，對NaCl的敏感性次之，對LiCl的敏感性與野生型相似；AkrA具有N端信號肽及跨膜序列，并具有棕櫚?；富钚?，AkrA缺失菌株對EGTA和LiCl超敏感，對NaCl敏感。(4)細胞壁合成抑制劑Calcoflour White和Congo Red對FapA缺失菌株和AkrA缺失菌株以及它們與CnaA的雙缺菌株具有不同的影響，且作用效果明顯，說明FapA、AkrA