大鼠腸杯狀細(xì)胞源性特異性蛋白的生理表達(dá)譜及其在潰瘍性結(jié)腸炎模型中的改變.pdf

1、背景與目的: 近年來，杯狀細(xì)胞因不僅限于分泌粘液保護(hù)腸粘膜的簡(jiǎn)單生理功能而廣受關(guān)注，隨著其特異表達(dá)的蛋白因子的發(fā)現(xiàn)，杯狀細(xì)胞可能涉及粘膜修復(fù)、粘膜免疫、腫瘤發(fā)生等多方面生理病理過程，但其機(jī)制尚不清楚。通過本實(shí)驗(yàn)了解杯狀細(xì)胞特異表達(dá)的蛋白因子rTFF3和rIgGFcγBP在大鼠全身的分布，及其在大鼠炎癥性腸病模型中的改變，有助于揭示杯狀細(xì)胞及其特異因子的生理功能以及參與炎癥性腸病發(fā)病過程的角色，進(jìn)一步認(rèn)識(shí)炎癥性腸病的發(fā)病機(jī)制。

2、 材料與方法: (1)對(duì)熟齡期Wistar大鼠全身多種器官組織和胚胎期Wistar大鼠腸道行活殺取材，用免疫組化法確定rTFF3和rIgGFcγBP在發(fā)育時(shí)期的生理分布，用SDS-PAGE電泳和Westernblot檢測(cè)rTFF3分子的存在模式；(2)用DSS飲水誘導(dǎo)法建立大鼠潰瘍性結(jié)腸炎模型，在模擬發(fā)病各期分別取材近遠(yuǎn)端結(jié)腸和收集相應(yīng)時(shí)間的糞便，組織切片以HE染色評(píng)估模型的有效性，以免疫組化法觀察rTFF3和rIgGFcγ

3、BP在疾病模型的粘膜中的變化規(guī)律；糞便樣本行dotblot，分析在疾病模型的糞便中rTFF3和rIgGFcγBP的含量變化，結(jié)合其在結(jié)腸粘膜組織中的變化推測(cè)其在炎癥性腸病中的合成、表達(dá)和分泌規(guī)律。 結(jié)果: (1)用自制兔抗大鼠rTFF3和rIgGFcγBP抗體作免疫組化染色顯示，rTFF3和rIgGFcγBP在Wistar大鼠胚胎期即開始表達(dá)于腸道，在熟齡期Wistar大鼠腸道粘膜中廣泛表達(dá)，含量豐富，陽(yáng)性著色主要位于杯

4、狀細(xì)胞胞漿中，在小腸絨毛全長(zhǎng)均有分布，以絨毛下段為主，在大腸中則主要分布于腸絨毛上段，另在膽管腺上皮中也有少量表達(dá)，在食管、氣管、胃、肝、胰腺、心、肺、脾、腎、膀胱、結(jié)膜、子宮頸、睪丸等未見表達(dá)；(2)DSS誘導(dǎo)的大鼠潰瘍性結(jié)腸炎模型形態(tài)學(xué)改變與人潰瘍性結(jié)腸炎的病理學(xué)改變相似，粘膜中的rTFF3和rIgGFcγBP在該疾病模型的發(fā)病期即呈減少，活動(dòng)期幾乎完全丟失，恢復(fù)期仍未恢復(fù)正常水平，而與此相應(yīng)，糞便中rTFF3和rIgGFcγBP大

5、量排出，尤以活動(dòng)期為甚，血清中rTFF3和rIgGFcγBP也保持了與正常對(duì)照時(shí)期相當(dāng)?shù)乃健?結(jié)論: (1)rTFF3和rIgGFcγBP是杯狀細(xì)胞特異性蛋白，在胚胎期腸道中即有顯著表達(dá)，可能是腸道發(fā)育必需的蛋白因子；在熟齡期腸道中表達(dá)豐富，主要表達(dá)于腸粘膜杯狀細(xì)胞和膽管柱狀上皮中，在腸道中的分布具有規(guī)律性，在小腸中以絨毛下段分布較為豐富，在大腸中則集中于絨毛上段，在小腸中這兩種蛋白的含量高于大腸。(2)粘膜中的rTF