免疫膠體金技術(shù)在鴨坦布蘇病毒和快速定量檢測Asial型口蹄疫病毒中的應(yīng)用.pdf

1、膠體金免疫層析技術(shù)(Immunochromatographic Assay, ICA)是在抗原和抗體特異反應(yīng)的基礎(chǔ)上并結(jié)合免疫層析分析技術(shù)和膠體金標(biāo)記技術(shù)，用膠體金標(biāo)記物作為探針，通過膠體金顆粒的顏色放大免疫反應(yīng)系統(tǒng)，使其結(jié)果直接顯示在固相載體上的一項新型體外檢測技術(shù)。它具有結(jié)果判定快速、操作簡便，標(biāo)本用量少、試劑穩(wěn)定、便于保存等優(yōu)點。廣泛應(yīng)用于臨床診斷。本文分別研制了鴨坦布蘇病毒免膠體金疫層析試紙條和快速定量檢測口蹄疫Asia1型病毒

2、膠體金免疫層析試紙條，并對試紙條的性能行進(jìn)了研究。主要內(nèi)容有以下幾個部分:
　　1.建立鴨坦布蘇病毒膠體金免疫層析試紙條方法
　　鴨坦布蘇病毒病是坦布蘇病毒(Duck tembus Virus，DTMUV)引起的是以鴨產(chǎn)蛋下降和死亡為主要特征的傳染病。2010年春天，在上海首先暴發(fā)。該病不知道來源。得病的鴨高燒、食欲下降、生長遲緩、產(chǎn)蛋率下降甚至導(dǎo)致死亡。并且迅速傳播到中國的東南部所有的省份，包括浙江、江蘇、福建、安徽等地。

3、到了冬天該病并沒有得到緩解。持續(xù)傳播到了山東、河南、湖南、湖北、江西。此病發(fā)病急，傳播迅速。發(fā)病對象主要為麻鴨。商品肉鴨也可被感染。DTMUV的檢測主要是病毒分離和分子生物學(xué)檢測。這些方法過程繁多，操作復(fù)雜，檢測時間長，成本高，而且還需要專業(yè)的設(shè)備和技術(shù)人員，不適合田間樣品的檢測。本研究利用檸檬酸三鈉還原法制備膠體金顆粒，鴨坦布蘇病毒制備的多克隆抗體分別作為膠體金標(biāo)記捕獲抗體和硝酸纖維素膜上檢測抗體，分別噴涂于玻璃纖維與硝酸纖維素膜，制

4、備形成鴨坦布蘇病毒膠體金試紙條。結(jié)果顯示:該試紙條與禽流感和新城疫無交叉反應(yīng)。本試驗對于敏感性、穩(wěn)定性和對田間樣品的檢測未做詳細(xì)的實驗，是試驗驗中的不足，還需要進(jìn)一步的研究來完善，從而使其更好的應(yīng)用于臨床。
　　2.建立快速定量檢測口蹄疫Asia1型病毒膠體金免疫層析試紙條方法
　　口蹄疫病(Foot-and-Mouth Disease，F(xiàn)MD)由口蹄疫病毒(Foot-and-Mouth DiseaseVirus，F(xiàn)MDV)

5、引起的侵害牛、豬、羊等多種偶蹄動物感染的急性、熱性和高度接觸性傳染病。其大規(guī)模流行給畜牧業(yè)生產(chǎn)和進(jìn)出口貿(mào)易造成巨大經(jīng)濟(jì)損失，快速而準(zhǔn)確地診斷該病，已成為口蹄疫防控技術(shù)研究的重要問題。FMD病原學(xué)診斷方法主要有病毒分離鑒定、間接夾心ELISA和RT-PCR等方法要求有熟練的試驗操作人員、特定的試驗室和專用儀器設(shè)備，因而檢測費用高。本研究采用膠體金為標(biāo)記物制備了快速定量檢測Asia1型FMD病毒免疫層析試紙條，擬合檢測曲線，用金標(biāo)分析儀進(jìn)行