不同證候食管癌差異表達基因研究.pdf

1、　　目的：利用基因芯片技術探討食管癌不同階段(癌組織、癌旁組織、正常組織)相關基因的表達,篩選不同證候食管癌組織的差異表達基因,初步揭示食管癌不同證候之間在基因表達上的相互關系,對其可能的分子機制進行分析。
　　方法：①建立食管癌組織標本庫及食管癌臨床資料數(shù)據(jù)庫,篩選嚴格配對的 21 例食管癌癌組織、癌旁組織及正常黏膜組織。對 21 例食管癌癌組織、癌旁組織、正常黏膜組織以及不同證候的痰氣交阻證( P)、瘀血內(nèi)結證( B)、津

2、虧熱結證( F)和氣虛陽微證( Q)的表達譜依次進行比較；②提取 21 例食管癌癌組織、癌旁組織及正常黏膜組織的總RNA,瓊脂糖凝膠電泳質檢,總 RNA 的純化,逆轉錄成 cDNA,并用單標法 Cy3-dUTP 標記于食管癌癌組織、癌旁組織及正常組織后制成探針,與基因表達譜芯片進行雜交,然后掃描芯片熒光信號圖像,采用 SAS軟件對芯片圖像進行分析,最后得到篩選的結果。
　　結果：①通過 SAS 軟件分析,癌組織與癌旁組織差異基

3、因 2505 個,癌組織與正常組織差異基因 2659 個。P 組與 B 組的癌組織共有差異基因 18個；癌旁組織共有差異基因 10 個；正常組織共有差異基因 6 個；P 組與F 組的癌組織共有差異基因 52 個；癌旁組織共有差異基因 8 個；正常組織共有差異基因 2 個；P 組與 Q 組的癌組織共有差異基因 52 個；癌旁組織共有差異基因 24 個；正常組織共有差異基因 46 個；Q 組與 B 組的癌組織共有差異基因 12 個；癌旁組織

4、共有差異基因 5 個；正常組織共有差異基因 84 個；Q 組與 F 組的癌組織共有差異基因 26 個；癌旁組織共有差異基因 6 個；正常組織共有差異基因 8 個；B 組與 F 組的癌組織共有差異基因 22 個,癌旁組織共有差異基因 8 個,正常組織共有差異基因 15 個。②對食管癌不同階段篩選出的差異基因進行 GO分類,主要分為三大類(細胞組成、分子功能和生物學過程)其中將這些差異基因按分子功能分主要涉及催化活性、信號轉導、分子轉運、結

5、合、酶活性調(diào)節(jié)、轉錄活性調(diào)節(jié)、蛋白運輸功能、細胞生長、凋亡等功能過程。③對食管癌不同階段篩選出的差異基因進行信號通路( pathway)分析,篩選出的主要信號通路為 ： Neuroregulin receptor degredation protein-1 Controls ErbB3 receptor recycling,cdc25 and chk1 Regulatory Pathway in response to DNA dama

6、ge , Inhibition of Matrix Metalloproteinases , Small Leucine-rich Proteoglycan (SLRP) molecule,Mechanism of Acetaminophen Activity and Toxicity 等主要的信號通路。對食管癌不同證候篩選出的差異基因進行信號通路( pathway)分析： P 組和 B 組存在的差異基因進行信號通路分析主要以 TSP-

7、1 Induced Apoptosis in Microvascular Endothelial Cell ,Drug metabolism - cytochrome P450 - Homo sapiens 和 Drug metabolism - other enzymes - Homo sapiens (human)通路為主； P 組和 F 組存在的差異基因進行信號通路分析發(fā)現(xiàn)主要與 Dendritic cells in regula

8、ting TH1 and TH2 Development, Sonic Hedgehog (SHH) Receptor Ptc1 Regulates cell cycle 和 ADP-Ribosylation Factor,通路有關；對 P 組和 Q 組存在的差異基因進行信號通路分析主要以 Sonic Hedgehog (SHH) Receptor Ptc1 Regulates cell cycle, Leukocyte transen

9、dothelial migration - Homo sapiens (human)、Antigen Dependent B Cell Activation、Alternative Complement Pathway, Small Leucine-rich Proteoglycan (SLRP) molecules 通路為主；對 Q 組和 B 組存在的差異基因進行信號通路分析主要以 Rab GTPases Mark Targets I

10、n The Endocytotic Machinery,Drug metabolism - cytochrome P450 - Homo sapiens (human), Transcriptional activation of dbpb from mRNA、Classical Complement Pathway, Complement Pathway 通路為主；對 Q 組和 F 組存在的差異基因進行信號通路分析主要以 Limone

11、ne and pinene degradation - Homo sapiens (human),Th1/Th2 Differentiation, The Co-Stimulatory Signal During T-cell Activation、Phospholipase C-epsilon pathway 通路為主；對 B 組和 F 組存在的差異基因進行信號通路分析主要以 Bone Remodelling, IL 17 Signa

12、ling Pathway, Drug metabolism -cytochrome P450 - Homo sapiens (human) 、Endocytosis - Homo sapiens (human)通路為主。
　　結論：①食管癌不同階段之間有其各自基因表達譜。其中神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白受體降解蛋白 1 調(diào)控 ErbB3 受體再循環(huán)信號傳導通路、基質金屬蛋白酶抑制信號通路、細胞周期信號傳導通路為食管癌三大主要信號傳導通路；②食

13、管癌中醫(yī)不同證候之間有其各自基因表達譜,痰氣交阻證候中差異基因功能主要是 DNA 甲基化、細胞增殖、DNA 復制和酶活性調(diào)節(jié)；津虧熱結證候中差異基因功能主要是 DNA 代謝過程、有絲分裂期、磷代謝過程；瘀血內(nèi)結證候中差異基因功能主要是有絲分裂細胞周期、核分裂、細胞(核)分裂、細胞增殖；氣虛陽微證候中差異基因功能主要是誘導細胞增殖和遷移、磷酸化作用和蛋白質轉運。③對食管癌中醫(yī)不同證候差異基因的信號通路分析,細胞周期信號傳導通路均涉及到食管