姜黃素抑制人在位及異位內(nèi)膜細(xì)胞生長(zhǎng)增殖與血管形成.pdf

1、目的： 研究姜黃素(Curcumin，Cur)對(duì)子宮內(nèi)膜異位癥異位及在位內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)增殖及血管形成的影響。 方法： 1、體外原代培養(yǎng)人子宮內(nèi)膜異位癥在位及異位內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞，應(yīng)用免疫細(xì)胞化學(xué)法進(jìn)行細(xì)胞鑒定；2、用不同濃度的姜黃素(0、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L、50μmol/L)分別處理體外培養(yǎng)的人子宮內(nèi)膜異位癥在位及異位內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞0、24h、48h、72h、96h后，(1)、倒置顯

2、微鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)狀況及細(xì)胞的形態(tài)變化；(2)、四甲基偶氮唑藍(lán)(3—(4,5-dimethylthiazol-2yi)-2，5-dipeylterazoliumbromide，MTT)法檢測(cè)其對(duì)內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)增殖的影響；(3)、流式細(xì)胞技術(shù)(folwcytometry，F(xiàn)CM)檢測(cè)不同濃度以及不同時(shí)間的姜黃素對(duì)在位及異位內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞凋亡及細(xì)胞周期的影響；(4)、免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)不同濃度以及不同時(shí)間點(diǎn)的姜黃素對(duì)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(Va

3、scularendothelialgrowthfactor，VEGF)表達(dá)的影響。 結(jié)果： 1、細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)果：體外培養(yǎng)的異位內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞14例，1例細(xì)菌污染，1例因所得標(biāo)本過(guò)少未培養(yǎng)成功。成功12例，成功率85.7％；在位內(nèi)膜培養(yǎng)16例，均成功；在位及異位內(nèi)膜細(xì)胞傳代培養(yǎng)成功；免疫細(xì)胞化學(xué)鑒定分離培養(yǎng)的在位及異位內(nèi)膜細(xì)胞，波形蛋白染色陽(yáng)性率均在95％以上。倒置顯微鏡下觀察，在位及異位內(nèi)膜細(xì)胞形態(tài)無(wú)明顯差異，24h貼壁后，

4、細(xì)胞呈紡錘形，隨時(shí)間的推移，細(xì)胞逐漸變長(zhǎng)，排列呈編織狀，邊界不清，細(xì)胞間無(wú)明顯的接觸抑制，細(xì)胞培養(yǎng)10代以內(nèi)形態(tài)基本不變；2、姜黃素作用結(jié)果：(1)形態(tài)學(xué)變化：不同濃度的姜黃素作用后，異位及在位內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖能力均下降，呈現(xiàn)濃度和時(shí)間依賴(lài)性，細(xì)胞形態(tài)發(fā)生明顯變化，10μmol/L濃度的姜黃素作用48h后，細(xì)胞形態(tài)變化不明顯，可見(jiàn)個(gè)別漂浮細(xì)胞，50μmol/L濃度的姜黃素作用48h后，貼壁細(xì)胞數(shù)量明顯減少，細(xì)胞生長(zhǎng)欠佳，形態(tài)變化明

5、顯，細(xì)胞出現(xiàn)核固縮，核漿比例減小，細(xì)胞透光性減低，培養(yǎng)液內(nèi)漂浮細(xì)胞明顯增多，隨處理時(shí)間的延長(zhǎng)，上述變化更為明顯。(2)細(xì)胞增殖變化：姜黃素可抑制異位及在位內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖且呈時(shí)間劑量依賴(lài)性，10μmol/L濃度的姜黃素作用后異位內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞在24h、48h、72h、96h的細(xì)胞抑制率分別為33.74％、52.23％、62.04％、68.72％，在位內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞的細(xì)胞抑制率分別為13.13％、30.29％、44.26％、58.14％

6、，50μmol/L的姜黃素作用后異位內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)的細(xì)胞抑制率分別為：51.61％、60.64％、70.00％、74.31％，在位內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞的細(xì)胞抑制率分別為24.94％、36.70％、52.68％、67.35％，姜黃素對(duì)異位內(nèi)膜細(xì)胞的抑制作用在每個(gè)時(shí)間點(diǎn)均強(qiáng)于在位內(nèi)膜(P＜0.05)，此抑制作用呈時(shí)間和劑量依賴(lài)性；(3)對(duì)凋亡的影響：AnnexinV—FITC和PI雙染結(jié)果顯示，姜黃素對(duì)在位及異位內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞均有明顯的促凋亡

7、作用。作用48h后，兩種細(xì)胞凋亡率明顯增高，凋亡率隨濃度的增加而增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．05)，姜黃素對(duì)異位內(nèi)膜細(xì)胞的促凋亡作用強(qiáng)于在位內(nèi)膜，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；(4)對(duì)細(xì)胞周期的影響：細(xì)胞周期檢測(cè)見(jiàn)姜黃素作用后，S期細(xì)胞數(shù)均減少，從G1期到S期發(fā)生抑制，此抑制作用隨濃度增加而增強(qiáng)(P＜0.05)，異位內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞G1期細(xì)胞百分?jǐn)?shù)由19.45±3.47逐漸增加到34.92±4.14(20μmol/L)和51.47±

8、5.07(50μmol/L)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，在位內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞G1期細(xì)胞百分?jǐn)?shù)由58.50±8.96逐漸增加到74.80±6.95(20μmol/L)和84.35±5.92(50μmol/L)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；(5)對(duì)VEGF表達(dá)的影響：免疫細(xì)胞化學(xué)結(jié)果顯示：姜黃素可明顯降低子宮內(nèi)膜異位癥在位及異位內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞VEGF的表達(dá)(P＜0.01)，作用48h后，異位內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞VEGF表達(dá)的陽(yáng)性率積分由12

9、0.80±19.46下降至70.60±5.32(20μmol/L)和50.80±9.09(50μmol/L)，在位內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞VEGF表達(dá)的陽(yáng)性率積分由83.00±9.35下降至54.40±5.32(10μmol/L)和40.60±4.88(50μmol/L)，對(duì)異位內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞VEGF表達(dá)的影響明顯強(qiáng)于在位內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞(P＜0.05)。 結(jié)論： 1、姜黃素可明顯抑制人子宮內(nèi)膜異位癥異位及在位內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞的生長(zhǎng)并促進(jìn)其凋