阿勒泰大尾羊FABP4、ADIPOQ和CFD基因分子克隆及其組織差異性表達(dá)的研究.pdf

1、目的：阿勒泰羊是一種脂臀型綿羊品種，其獨(dú)特的尾脂在維持機(jī)體正常的新陳代謝和體溫過程中扮演了重要的角色，主要通過尾部脂肪沉積與代謝消長規(guī)律來適應(yīng)惡劣的環(huán)境以維持機(jī)體正常的新陳代謝和體溫，是研究綿羊尾脂沉積與代謝機(jī)制的理想模型。近年來的研究表明，F(xiàn)ABP4、ADIPOQ和 CFD基因參與葡萄糖和脂肪酸代謝以及脂肪細(xì)胞分化等生理過程，初步推測(cè)其與脂肪沉積代謝密切相關(guān)。本文以阿勒泰羊?yàn)檠芯繉?duì)象，探討了 FABP4、ADIPOQ、CFD基因?qū)Π⒗?/p>

2、泰羊尾脂沉積與代謝的影響。
　　方法：
　　1、阿勒泰羊饑餓與非饑餓模型的構(gòu)建。模擬阿勒泰羊在自然生理狀態(tài)下尾脂沉積與代謝兩種極端狀態(tài)，即在夏秋季節(jié)牧草豐茂時(shí)脂肪沉積、春冬季節(jié)牧草匱乏時(shí)尾脂分解代謝的方式，對(duì)阿勒泰羊進(jìn)行了饑餓試驗(yàn)，構(gòu)建了阿勒泰羊饑餓與非饑餓狀態(tài)下尾脂沉積與代謝的動(dòng)物模型。
　　2、以阿勒泰羊尾脂組織 cDNA為模板，通過 RT-PCR方法克隆獲得 FABP4、ADIPOQ和 CFD基因完整的 CDS區(qū)

3、序列。
　　3、以阿勒泰羊心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟、肌肉、腸系膜脂肪、尾脂等主要組織 cDNA為模板，采用半定量 RT-PCR方法獲得 FABP4、ADIPOQ和 CFD基因在阿勒泰羊不同組織中的表達(dá)譜。
　　4、應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量 PCR技術(shù)檢測(cè)了 FABP4、ADIPOQ和 CFD基因在阿勒泰羊饑餓與非饑餓模型尾脂組織中的表達(dá)變化情況。
　　結(jié)果：
　　1、通過2周逐步限飼和4周完全禁食（期間自由飲水）后，

4、饑餓模型阿勒泰羊精神上表現(xiàn)出焦躁不安、采食欲望強(qiáng)烈；其臀尾表現(xiàn)出“癟瘦”表型，臀尾部皮膚松弛、軟塌，臀部尾脂體積減小了1/3以上；體重顯著下降；尾脂脂肪細(xì)胞體積變小，呈扁平的梭形。
　　2、克隆得到綿羊 FABP4、ADIPOQ和 CFD基因完整的 CDS序列，分別編碼132、239、261個(gè)氨基酸。綿羊 FABP4核苷酸序列及氨基酸序列與山羊、牛、牦牛、馬鹿等反芻動(dòng)物對(duì)應(yīng)序列的同源性均高達(dá)90％以上；綿羊 ADIPOQ基因的核苷

5、酸序列與牛、小鼠、大鼠、野豬、人等對(duì)應(yīng)序列的同源性在75%以上，其中與牛對(duì)應(yīng)序列的同源性高達(dá)85%以上；綿羊 CFD基因核苷酸序列及其編碼的氨基酸序列與反芻動(dòng)物牛的同源性均高達(dá)96.9%以上。
　　3、半定量 RT-PCR檢測(cè)結(jié)果表明，F(xiàn)ABP4基因在阿勒泰羊心臟、肺臟、肌肉、腸系膜脂肪、尾脂組織中均有表達(dá)，但在腸系膜脂肪和尾脂中高豐度表達(dá)；ADIPOQ基因在尾脂組織中特異性高表達(dá)；CFD基因在心臟、肝臟、脾臟、肺臟、肌肉、尾脂中

6、均表達(dá)，但在尾脂中高豐度表達(dá)。
　　4、實(shí)時(shí)熒光定量 PCR結(jié)果表明，阿勒泰羊 FABP4基因在非饑餓組尾脂中的表達(dá)量略高于饑餓組尾脂，但二者差異不顯著；ADIPOQ、CFD基因則結(jié)果相反，阿勒泰羊 ADIPOQ和CFD基因在饑餓組尾脂中的表達(dá)量顯著高于在饑餓組尾脂中的表達(dá)。
　　結(jié)論：上述結(jié)果表明，F(xiàn)ABP4、ADIPOQ、CFD基因在阿勒泰羊尾脂沉積與代謝過程中具有一定的調(diào)控作用，可以作為哺乳動(dòng)物脂肪組織發(fā)育調(diào)控過程中重