微生物法選擇性水解烯丙醇酮乙酸酯.pdf

1、烯丙菊酯是第一個工業(yè)化的擬除蟲菊酯產(chǎn)品，因其具有快速殺蟲且安全無害等優(yōu)點，逐漸成為在市場上不斷推廣的一類重要殺蟲劑。4-羥基-3-甲基-2-2-(2-烯丙基)-環(huán)戊烯酮(簡稱HMPC)是合成烯丙菊酯的重要中間體。HMPC含一個手性中心，有兩個對映體結構，其中S構型是活性成分。含(S)-HMPC的烯丙菊酯的殺蟲活力是消旋烯丙菊酯的4倍多，因此研究生物法拆分消旋HMPC制備(S)-HMPC具有極大的應用前景。 本文以烯丙醇酮乙酸酯為

2、唯一碳源，經(jīng)過富集培養(yǎng)從土壤中分離出200多株菌株，經(jīng)過一系列初篩復篩，從中挑取活性較高且選擇性最好的7＃菌株為產(chǎn)酶菌株，該菌株所產(chǎn)水解酶能夠優(yōu)先水解(R)-烯丙醇酮乙酸酯。經(jīng)過測定菌株16SrRNA基因序列及進行生理生化實驗佐證，基本確定7＃菌株為銅綠假單胞菌。對7＃菌株進行兩輪紫外和一輪DES誘變，得到產(chǎn)酶量大幅提高的突變株L8-3b19，發(fā)酵液酶活由初始的77.1U/l提高到248.3U/l。是原先的約3.2倍。對突變株的產(chǎn)酶條件

3、進行了優(yōu)化，得到最佳產(chǎn)酶培養(yǎng)基為：酵母膏10g/l，吐溫-80 10g/l，(NH<,4>)<,2>SO<,4> 2.0k/l，K<,2>HPO<,4> 2.0g/lq,NaCl 1.0g/l,MgSO<,4> 0.2g/l,pH 7.0；最佳產(chǎn)酶培養(yǎng)條件為：種齡為18h，接種量為10％，培養(yǎng)溫度為30℃，搖床轉速200rpm,初始pH為7.0， 250ml搖瓶裝液30ml，最佳產(chǎn)酶時間為18h。通過以上優(yōu)化工作，水解酶產(chǎn)量由最初的約2