升丹制劑——五五丹外用對大鼠的腎毒性及毒性機制研究.pdf

1、目的：基于中醫(yī)理論，在前期研究的基礎上，根據(jù)臨床用藥模式，考察五五丹的毒性及其毒性機制，為臨床的安全用藥提供科學依據(jù)，進而構建符合中醫(yī)臨床特色的安全性評價模式。
　　 方法：通過對破損皮膚模型大鼠連續(xù)給予五五丹4周及停藥1周的毒性特征研究以及TUNEL法、免疫組織化學法等研究五五丹對腎臟細胞凋亡的影響，并進一步檢測細胞凋亡過程中Bax/Bcl-2、信號轉(zhuǎn)導(NF-κB)等相關蛋白表達變化以揭示其作用機理，為臨床安全用藥提供安全依

2、據(jù)。
　　 結(jié)果：五五丹高、中、低劑量組在給藥第7、21、28天時均引起大鼠腎臟系數(shù)顯著增加(*p＜0.05，**p＜0.01)。五五丹高劑量組在給藥第7、28天時均引起大鼠胸腺系數(shù)顯著下降(**p＜0.01)。五五丹高劑量組在給藥第14天時引起大鼠谷丙轉(zhuǎn)氨酶(*p＜0.05)及谷草轉(zhuǎn)氨酶(**p＜0.01)水平明顯升高。五五丹高劑量組在給藥第28天時引起大鼠尿素氮(**p＜0.01)水平明顯升高。
　　 五五丹大劑量應

3、用后大鼠腎臟主要表現(xiàn)為腎小管腔明顯擴張，上皮細胞明顯變性、壞死，多數(shù)大鼠腎小球無明顯改變。高劑量對腎臟的毒性作用1-2周時最明顯，以后隨著用藥時間的延長，毒性作用反而有所減輕。4周時腎臟的病變最輕，在恢復期出現(xiàn)修復性改變（腎小管再生）。對卵巢、子宮有一定的毒性作用，對睪丸生精有抑制作用。高劑量1周時引起皮質(zhì)部胸腺細胞壞死，2周～4周胸腺有輕度～中度萎縮，恢復期病變明顯減輕、胸腺的組織形態(tài)學結(jié)構基本恢復正常。五五丹高劑量對腎臟組織的凋亡誘

4、導作用1-2周時最明顯，以后隨著用藥時間的延長，毒性作用減輕。五五丹在用藥4周，停藥恢復1周后，腎臟組織的凋亡程度明顯減輕。
　　 五五丹外用1-2周時即可引起B(yǎng)ax表達水平顯著性升高，同時Bcl-2表達水平明顯下降（*p＜0.05或**p＜0.01），以后隨著用藥時間的延長，其對Bax及Bcl-2蛋白表達的影響明顯減弱。
　　 五五丹外用1-2周時即可引起NF-κB表達水平顯著性升高(*p＜0.01),3-4周時仍處于

5、較高水平,5周時NF-κB表達水平明顯下降。
　　 結(jié)論：1．五五丹大劑量應用對大鼠臟器有明顯的毒性表現(xiàn)。腎臟發(fā)生損害的形態(tài)學改變，主要表現(xiàn)為腎小管改變而多數(shù)大鼠腎小球無明顯改變。肝臟的功能雖受到損害，但肝臟的病理組織學改變卻不顯著。卵巢、子宮、睪丸、胸腺等器官有不同程度毒性損害。
　　 2．五五丹對腎毒性與用藥劑量呈正相關關系，即用藥劑量的加大，對腎臟的毒性作用增加；五五丹對腎毒性與用藥時間呈一定的相關關系，高劑量對腎

6、臟的毒性作用1-2周時最明顯，中劑量和低劑量2周時達高峰，此后減輕。五五丹在用藥4周，停藥恢復1周后，腎臟的病變程度明顯減輕，提示在本研究所使用的劑量和時間范圍內(nèi)腎功能可以恢復。
　　 3．五五丹引起的腎臟組織凋亡與用藥劑量和時間有密切關系，1-2周時最明顯，此后減輕。用藥4周，停藥恢復1周后，腎臟組織的凋亡程度明顯減輕，提示在所使用的劑量和時間范圍內(nèi)具有一定的可逆性。
　　 4．五五丹可通過調(diào)控Bax/Bcl-2凋亡相

7、關蛋白表達水平引起腎臟細胞凋亡，效應具有一定的劑量效應及時間效應關系，2～3周時達高峰，具有一定的可逆性。提示機體對五五丹具有一定的適應能力，可通過調(diào)節(jié)其相關代謝或增強其損傷修復功能從而使其毒性降低。
　　 5．NF-κB參與五五丹誘導的大鼠腎臟細胞凋亡，五五丹可通過調(diào)控NF-κB凋亡相關蛋白表達水平引起腎臟細胞凋亡。毒性大，則NF-κB表達水平顯著性升高。用藥時間延長，對NF-κB蛋白表達的影響明顯減弱。
　　 6．推