PDGF-BB促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞腹腔播散的機(jī)制研究.pdf

1、目的:研究platelet-derived growth factor-BB(PDGF-BB)是否能夠使間皮細(xì)胞（mesothelial cell）活化，即發(fā)生間皮間質(zhì)化（MMT）,進(jìn)而增強(qiáng)卵巢癌細(xì)胞的腹腔黏附能力。
　　方法:收集2014年華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院婦科腫瘤科室非癌患者的良性腹腔沖洗液和卵巢癌患者腹水，分離出間皮細(xì)胞進(jìn)行原代培養(yǎng)。良性腹腔沖洗液分出的間皮細(xì)胞本文用mc表示，卵巢癌腹水分離出的間皮細(xì)胞用MC

2、表示。通過上皮屬性標(biāo)志細(xì)胞角蛋白（CK7）和間質(zhì)屬性標(biāo)志波形蛋白（Vim）、α-平滑肌蛋白（α-SMA）的細(xì)胞免疫熒光對分離的間皮細(xì)胞鑒定以供后續(xù)試驗(yàn)。觀察比較培養(yǎng)后良性腹腔沖洗液和惡性腹水來源的間皮細(xì)胞特征的不同，通過 Western Blot驗(yàn)證MMT相關(guān)指標(biāo)的變化，如：血小板源性生長因子受體β多肽（PDGFR-β）、E-cad、Vim、α-SMA、fibronectin、 collagen I；利用tra ns we ll小室比較

3、良性腹腔沖洗液和惡性腹水來源的間皮細(xì)胞的侵襲能力；分別收集10例良性腹腔沖洗液和惡性卵巢癌腹水，用細(xì)胞因子芯片去驗(yàn)證兩者間所含可溶性因子的不同，用ELISA比較PDGF-BB分別在腹水和良性腹腔沖洗液中的濃度差異，并且用KMPLOT預(yù)測PDGFR與卵巢癌患者的預(yù)后關(guān)聯(lián)性；PDGF-BB(50ng/ml)分別處理間皮細(xì)胞mc1，mc2，mc324小時(shí)后利用transwell小室驗(yàn)證間皮細(xì)胞自身侵襲能力的變化和對卵巢癌細(xì)胞系SKOV3的趨化

4、能力的變化；體外黏附實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證PDGF-BB處理間皮細(xì)胞后腫瘤細(xì)胞球體對其黏附能力和后續(xù)細(xì)胞球體的鋪展能力的變化。SKOV3的條件培養(yǎng)基（SK-CM）處理間皮細(xì)胞是否可得到與 PDGF-BB同樣的功效，同時(shí)應(yīng)用PDGFR阻斷劑伊馬替尼（Imatinib，20μmol/L）處理間皮細(xì)胞24小時(shí)后，驗(yàn)證是否能逆轉(zhuǎn)上述生物學(xué)效應(yīng)。
　　結(jié)果:腹腔沖洗液中可分離出間皮細(xì)胞，細(xì)胞免疫熒光顯示該間皮細(xì)胞表達(dá)CK7、Vim，不表達(dá)α-SMA。MC

5、較 mc而言，細(xì)胞形態(tài)明顯的長梭樣，形態(tài)類似肌成纖維細(xì)胞；Western Blot試驗(yàn)結(jié)果顯示MC比mc的E-cad上皮性蛋白表達(dá)降低，相反，Vim、α-SMA、fibronectin、 collagen I和PDGFR-β肌成纖維細(xì)胞相關(guān)蛋白表達(dá)升高，transwell小室顯示MC較mc侵襲增多；細(xì)胞因子芯片篩選出TGFβ-1和PDGF-BB在腹水中高表達(dá)，ELISA結(jié)果顯示，PDGF-BB在腹水中的數(shù)量級(jí)為103pg/ml，而良性液

6、體數(shù)量級(jí)中僅為102 pg/ml，KMPLOT預(yù)測PDGFR與卵巢癌患者的預(yù)后呈負(fù)向關(guān)聯(lián)；且體外試驗(yàn)觀察到PDGF-BB處理后增加了間皮細(xì)胞的侵襲能力、對SKOV3的趨化能力以及卵巢癌細(xì)胞對間皮細(xì)胞的黏附能力和鋪展能力。SK-CM處理細(xì)胞后得到與PDGF-BB同樣的生物學(xué)效應(yīng)，應(yīng)用PDGFR-α的阻斷劑Imatinib后，逆轉(zhuǎn)了上述生物學(xué)效應(yīng)。
　　結(jié)論:卵巢癌患者腹水中含有大量的PDGF-BB，并且PDGF-BB能夠使間皮細(xì)胞發(fā)