XPG基因多態(tài)性與鼻咽癌鉑類化療敏感性的研究.pdf

1、背景：當(dāng)細(xì)胞DNA受損后，細(xì)胞會產(chǎn)生一系列的反應(yīng)來修復(fù)受損DNA的結(jié)構(gòu)，使之恢復(fù)正常功能。目前在哺乳動物細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)了五個(gè)堿基剪切修復(fù)(BER)、直接修復(fù)(DR)、錯(cuò)配修復(fù)(MMR)、核苷酸剪切修復(fù)(NER)以及雙鏈斷裂修復(fù)(DSBR)。如果細(xì)胞DNA修復(fù)功能出差，未能及時(shí)的修復(fù)受損的DNA會導(dǎo)致基因突變增加個(gè)體患腫瘤的風(fēng)險(xiǎn)。對人類而言,不同個(gè)體的基因存在極小(0.1％)的差異，這種差異就導(dǎo)致了個(gè)體對某些疾病的易感性不同。這些基因組的不同

2、表現(xiàn)在單核苷酸位點(diǎn)多態(tài)性(單核苷酸多態(tài)性)。研究表明,這些單核苷酸多態(tài)性的作用與其在基因中的位置有關(guān)。而與DNA損傷的修復(fù)途徑有關(guān)的基因組的單核苷酸多態(tài)性，會影響細(xì)胞修復(fù)受損DNA的能力,導(dǎo)致細(xì)胞惡變。鼻咽癌是常見的頭頸部惡性腫瘤，在亞洲為高發(fā)地區(qū)。在我國的高發(fā)病地區(qū)為南方包括廣東、廣西、福建、湖南和江西。其發(fā)病的特點(diǎn)具有區(qū)域性，家族性，并有一定的遺傳傾向，很多研究以為該病的發(fā)生也與EB病毒感染有關(guān)，但其具體的發(fā)病機(jī)制仍然不明確。疾病早

3、期無明顯癥狀，僅有鼻塞或回涕帶血，因其向上侵犯顱底可引起頭痛，早期以淋巴轉(zhuǎn)移為主故常見上頸部淋巴結(jié)腫大。該病的這種特點(diǎn)，決定了患者難以早期就診，而就診時(shí)常常已經(jīng)有明顯的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，或較廣泛的局部侵犯，診斷時(shí)以局部晚期為主。那么鼻咽癌患者中是否存在易感基因,能否分辨哪些是高危人群,從而進(jìn)行預(yù)防,并做到早期診斷、早期治療。
　　細(xì)胞對化療藥物產(chǎn)耐藥較常見的保護(hù)性反應(yīng)停滯在G2/M期。細(xì)胞周期中的G2/M期是細(xì)胞檢測DNA損傷并對其進(jìn)行

4、修復(fù)的階段。鉑類藥物通過共價(jià)結(jié)合到基因組DNA上,形成鉑-DNA加合物,引起DNA合成障礙。如果此鉑-DNA加合物未被及時(shí)的去除掉,就會引起核苷酸的替換,缺失,染色體重排,從而誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生凋亡。如果DNA損傷修復(fù)能力提高及時(shí)的修復(fù)受損的DNA便可引起細(xì)胞對鉑類藥物耐藥。核苷酸酸切除修復(fù)(NER)通路是識別修復(fù)鉑-DNA加合物的主要通路。核苷酸切除修復(fù)通路是人類細(xì)胞DNA修復(fù)的主要途徑,與多種抗腫瘤藥物有關(guān)。
　　該通路對鉑-DNA

5、加合物的修復(fù)過程如下:XPC-hHR23B對損傷部位進(jìn)行識別結(jié)合,并吸引核苷酸切除修復(fù)修復(fù)復(fù)合物聚集到損傷區(qū)域,XPA/RPA結(jié)合到此復(fù)合物并進(jìn)一步吸引ERCCI-XPF。TFllH在損傷區(qū)域進(jìn)行受損DNA的解鏈,然后XPG核酸酶在損傷部位3'端進(jìn)行切割,ERCCI-XPF在5'末端進(jìn)行切割,去除鉑-DNA加合物后，再對DNA鏈的缺口進(jìn)行修補(bǔ),最后并由DNA連接酶修復(fù)損傷鏈,完成整個(gè)的修復(fù)過程。
　　當(dāng)前局部晚期鼻咽癌的推薦治療為

6、放化療綜合治療，化療方案推薦使用含鉑的方案，比如：5氟尿嘧啶聯(lián)合順鉑。常用的放化療聯(lián)合方法有包括誘導(dǎo)化療，輔助化療，同步放化療，誘導(dǎo)化療加輔助化療，誘導(dǎo)化療加同步放化療，同步放化療加輔助化療等。化療后腫瘤縮小減少放療時(shí)的腫瘤負(fù)荷，同時(shí)使腫瘤細(xì)胞會對放射的敏感性增加提高療效，所以將放療與化療有機(jī)的結(jié)合可以提高臨床療效。有專家認(rèn)為誘導(dǎo)化療加同步放化療更值得推薦。但對于那些化療不敏感的患者，誘導(dǎo)化療并不能抑制腫瘤的進(jìn)展，那么遲到的放療其療效也

7、會受到影響，甚至有的患者因腫瘤進(jìn)展而失去了根治的機(jī)會。那么我們現(xiàn)在要解決的問題是：因?yàn)椴荒苊鞔_患者對化療的敏感性，所以何時(shí)選擇化療的介入是我們要面對的問題。如果我們能夠分辨出患者對化療敏感性，那么敏感的患者可以使用誘導(dǎo)化療加同步放化療的方案，而對化療不敏感的患者則選用直接同步放化療的方案。
　　目的：核苷酸切除修復(fù)（NER）通路中G組著色性干皮病（XPG）蛋白起著重要的作用。其遺傳變異會影響DNA修復(fù)的能力，可能會增加細(xì)胞癌變的風(fēng)

8、險(xiǎn)。為此，我們研究XPG基因多態(tài)性與鼻咽癌遺傳易感性的關(guān)系。在一些關(guān)于肺癌，大腸癌及卵巢癌的研究中，XPG的基因多態(tài)性已經(jīng)被認(rèn)為與鉑藥物化療的療效有關(guān)。我們要研究在鼻咽癌的患者中，XPG的基因多態(tài)性與以鉑類藥物為基礎(chǔ)的化療療效之間相關(guān)性。
　　方法：我們從 NCBI數(shù)據(jù)庫與 dbSNP(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)和SNPinfo(http://snpinfo.niehs.nih.gov/)中選擇感興

9、趣的潛在的XPG單核苷酸多態(tài)性。最后，我們的研究選擇了4個(gè)潛在功能性位點(diǎn)（rs2296147，rs2016073，rs751402以及rs2094258）。我們在372例鼻咽癌病人及371例健康人之間進(jìn)行對照研究，首先提取到外周血DNA，然后用連接酶檢測反應(yīng)（ligase detection reaction，LDR）技術(shù)檢測外周血 DNA XPG基因4個(gè)位點(diǎn)的單核苷酸多態(tài)性，應(yīng)用單因素和多因素logistic回歸分析計(jì)算比值比(OR)

10、及95%置信區(qū)間(CI)來評估這4個(gè)位點(diǎn)與鼻咽癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)聯(lián)程度。選擇2013年2月到2014年5月在我市多家醫(yī)院經(jīng)病理確診為鼻咽癌患者,共372例，隨訪到2014年10月。首選提取患者外周血的DNA，然后采用連接酶檢測反應(yīng)（ligase detection reaction，LDR）技術(shù)檢測鼻咽癌患者外周血 DNA XPG基因4個(gè)位點(diǎn)的單核苷酸多態(tài)性（rs2296147，rs2016073，rs751402以及rs2094258）。

11、所有的患者行2個(gè)周期順鉑+氟尿嘧啶(Cisplatin+5-Fluorouracil，PF)方案化療?；熀?1天，復(fù)查胸腹部CT及頭頸MRI。按照 RECIST1.1標(biāo)準(zhǔn)評價(jià)化療療效，CR+PR評價(jià)為化療敏感組，SD+PD評價(jià)為化療不敏感組，分析 XPG單核苷酸多態(tài)性與化療敏感性的關(guān)系。
　　結(jié)果：
　　1.我們研究的4個(gè)XPG基因單核苷酸多態(tài)性，所觀察到的基因型頻率均符合Hardy-Weinberg控制平衡。Logist

12、ic回歸分析顯示，我們所選擇的4個(gè)潛在功能性位點(diǎn)的單核苷酸多態(tài)性均未顯示出鼻咽癌發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)存在關(guān)聯(lián)。
　　2.鼻咽癌患者XPG的4個(gè)位點(diǎn)（rs2296147，rs2016073，rs751402以及rs2094258）的單核苷酸多態(tài)性基因型中，rs2296147 CT+CC比TT基因型的化療療效要好（60.5%vs.43.7%，P<0.05），rs2094258 AG+GG基因型比AA基因型的化療療效要好（59.2%vs.43.2%

13、，P<0.05），此2個(gè)單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)的不同基因型之間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.039）。XPG基因中rs2016073和rs751402位點(diǎn)的單核苷酸多態(tài)性與鼻咽癌患者順鉑化療預(yù)后無關(guān)。
　　結(jié)論：
　　1.我們的研究結(jié)果表明，XPG基因的變異可能不會影響鼻咽癌發(fā)病的風(fēng)險(xiǎn)。仍需要更多樣本為基礎(chǔ)的和額外的功能性研究來驗(yàn)證我們的結(jié)果。
　　2.我們的研究表明在鼻咽癌患者中rs2296147 CT+CC和rs209