HCV核心蛋白氨基酸變異與干擾素應(yīng)答關(guān)系研究.pdf

1、丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)感染已呈全球流行的發(fā)展態(tài)勢(全球超過1.8億人感染,我國直接受累人口就有約4200萬,年均新發(fā)病例數(shù)也在急劇上升,從2005年的5.3萬人/年到2012年的21.9萬人/年),感染后易發(fā)生慢性化并可能演變?yōu)楦斡不透伟?已成為不可忽視的公共衛(wèi)生問題。聚乙二醇化干擾素(pegylated interferon,PEG-IFN)聯(lián)合利巴韋林(ribavirin,RBV)是我國目前治療

2、丙型肝炎的標(biāo)準(zhǔn)方案。不同基因型HCV對聯(lián)合治療的應(yīng)答反應(yīng)差別顯著,單純考慮宿主因素(如IL-28BSNP)不能完全解釋療效差異,且初治無應(yīng)答的患者再治療時約17％~24%可獲得持續(xù)病毒學(xué)應(yīng)答(sustained virological response,SVR),初治有應(yīng)答但停藥后復(fù)發(fā)的患者再治療時約44%~62%不能產(chǎn)生有效應(yīng)答[1-3],其機(jī)制仍不清楚。說明病毒自身可影響干擾素療效,一方面也提示可從病毒遺傳進(jìn)化差異的角度尋找干擾素治

3、療失敗的原因。核心蛋白(Core protein)是病毒核衣殼的重要組成部分,與宿主蛋白間存在大量的交互作用,參與調(diào)控基因轉(zhuǎn)錄表達(dá),影響機(jī)體免疫,一直是HCV致病機(jī)制和防治的研究熱點(diǎn)之一?；A(chǔ)研究表明核心蛋白可與信號傳導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活因子(signal transducer and activator of transcription,STAT)級聯(lián)通路相互作用,減少干擾素刺激基因(interferon stimulate gene,ISG

4、)轉(zhuǎn)錄[4-5],提示核心蛋白在抵抗干擾素療效的過程中發(fā)揮作用。臨床研究也報道了核心蛋白第70、91等位點(diǎn)的氨基酸變異在SVR與non-SVR組間存在差異[6],尤其在1b型患者,認(rèn)為70Gln(Q)/91Met(M)變異是產(chǎn)生干擾素?zé)o應(yīng)答反應(yīng)的獨(dú)立預(yù)測因子[7-8]。而Fusao等[9]在核心蛋白第70、91位點(diǎn)分別制造R-Q、L-M的點(diǎn)突變體轉(zhuǎn)染4種肝細(xì)胞系后,發(fā)現(xiàn)2′,5′-OAS啟動子活性、mRNA及蛋白表達(dá)均增加,但這些ISG

5、s的表達(dá)水平在各個突變組之間幾乎沒有差別;Kumthip等[10]的研究也認(rèn)為,至少在1、3型丙肝患者中,不存在與治療失敗相關(guān)的核心蛋白氨基酸變異。因此,核心蛋白氨基酸變異與干擾素應(yīng)答有無關(guān)聯(lián)仍然存在爭議。在我國,HCV常見感染型別有1b、2a、3a/3b、6a,分別占據(jù)約51.9%、29.4%、8.9%、4.8%的疾病構(gòu)成比例[11]。本研究擬回顧性收集建立在我科就診的慢性丙型肝炎患者聚乙二醇干擾素治療隊列,通過逆轉(zhuǎn)錄巢式PCR(RT

6、-nested-PCR)擴(kuò)增核心蛋白區(qū)域,分析我國上述4種常見HCV基因型核心蛋白功能區(qū)氨基酸替換模式,主要目標(biāo)在于判斷其氨基酸替換與干擾素應(yīng)答敏感性的關(guān)聯(lián),以期用于臨床治療前預(yù)判干擾素治療應(yīng)答反應(yīng),指導(dǎo)個體化治療方案的決策;次要目的是分析各個氨基酸位點(diǎn)之間氨基酸的替換模式是否存在關(guān)聯(lián),是否具有基因型特異性。
　　主要研究結(jié)果:
　　1.各基因型之間普遍存在的HCV核心蛋白氨基酸高頻替換(替換頻率>10%)主要發(fā)生于第70、

7、75、91、106、110、147、187位7個殘基位點(diǎn),上述位點(diǎn)之間存在廣泛但相對較弱的連鎖替換關(guān)系;
　　2.多數(shù)位點(diǎn)的氨基酸替換具有基因型偏嗜性,少數(shù)位點(diǎn)的氨基酸替換發(fā)生了親疏水性質(zhì)的改變,可能與產(chǎn)生治療應(yīng)答差異有關(guān);
　　3.HCV核心蛋白第70位氨基酸的Q/non-Q替換、第91位氨基酸的M/non-M替換、第110位氨基酸的T/non-T替換在SVR組和non-SVR兩組之間具有顯著差異(P值分別為0.004、0

8、.039、0.025);
　　4.核心蛋白的70Q、91M、110T替換(定義為干擾素應(yīng)答―抵抗型‖替換)更傾向于發(fā)生獲得非持續(xù)病毒學(xué)應(yīng)答的干擾素應(yīng)答結(jié)局,OR值及95%CI分別為0.288(0.120~0.693)、0.413(0.177~0.966)、0.346(0.133~0.896);
　　5.血清HCV核心蛋白同時表現(xiàn)為上述2個以上的―抵抗型‖氨基酸替換的患者,其治療早期(4周、8周時)的HCVRNA滴度下降更緩慢

9、(P=0.001)。
　　結(jié)論:
　　1.HCV核心蛋白區(qū)的氨基酸替換并非是隨機(jī)散在、頻發(fā)而無規(guī)律的事件,提示核心蛋白可能通過多個氨基酸位點(diǎn)的協(xié)同替換抵抗干擾素應(yīng)答;
　　2.HCV核心蛋白區(qū)第70、91、110三個氨基酸位點(diǎn)可作為治療前預(yù)測干擾素應(yīng)答反應(yīng)的優(yōu)選氨基酸位點(diǎn);
　　3.本質(zhì)上,推測氨基酸變異可影響干擾素抗病毒應(yīng)答是由于:已報道的幾個位點(diǎn)的核心蛋白氨基酸替換可能通過多種途徑協(xié)同影響核心蛋白的功能活性。