卵巢癌患者外周血、腹水和腫瘤組織中γδT細(xì)胞的細(xì)胞毒活性及TCRδ鏈基因表達(dá)多態(tài)性研究.pdf

1、中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文卵巢癌患者外周血、腹水和腫瘤組織中γδT細(xì)胞的細(xì)胞毒活性及TCRδ鏈基因表達(dá)多態(tài)性研究姓名：牛海濤申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專(zhuān)業(yè)：免疫學(xué)指導(dǎo)教師：何維20000501生里塑塑墨型查蘭堡主蘭些絲墨主苧塑莖：!!：yS／ctl3T細(xì)胞對(duì)同種異體／自體卵巢上皮癌細(xì)胞的細(xì)胞毒活性，并研究了hspTO分子對(duì)yST細(xì)胞殺傷卵巢上皮癌細(xì)胞有無(wú)影響；采用卵巢上皮癌細(xì)胞系SKOV3為靶細(xì)胞，在裸鼠體內(nèi)進(jìn)行Ty3T細(xì)胞的抑瘤實(shí)驗(yàn)；通過(guò)逆

2、轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT—PCR)在轉(zhuǎn)錄水平測(cè)定了TCRV6主要亞型(V61、V62和V63)在卵巢上皮癌患者外周血及腫瘤浸潤(rùn)部位的表達(dá)；采用基因掃描技術(shù)分析了TCRV6各亞型T淋巴細(xì)胞的多態(tài)性。結(jié)果：通過(guò)固相抗體法分離擴(kuò)增得到了來(lái)源于卵巢上皮癌不同組織的的yST細(xì)胞：ySTIL(選擇擴(kuò)增于腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞)、ySTAL(選擇擴(kuò)增于腫瘤相關(guān)淋巴細(xì)胞)和bloody3T細(xì)胞(選擇擴(kuò)增于外周血單個(gè)核細(xì)胞)，擴(kuò)增純度在四周內(nèi)最高可達(dá)到95％，細(xì)

3、胞數(shù)量可達(dá)到108。但不同組織來(lái)源的yST細(xì)胞擴(kuò)增到一定純度所需時(shí)間有所差別。其擴(kuò)增純度達(dá)到70％的時(shí)間順序?yàn)椋和庵躂IRyST細(xì)胞最快，約14天左右；，／6TAL次之，約2l天左右，75TIL所需時(shí)間最長(zhǎng)，約28天左右。在y6T細(xì)胞建系的同時(shí)，進(jìn)行了原代卵巢上皮癌細(xì)胞的同步培養(yǎng)，經(jīng)鑒定，體外擴(kuò)增得到的腫瘤細(xì)胞為高純度的卵巢上皮癌細(xì)胞，同時(shí)發(fā)現(xiàn)無(wú)論是新建系的卵巢上皮癌細(xì)胞還是長(zhǎng)期建系的卵巢上皮癌細(xì)胞株表面均基本不表達(dá)hspTO分子，與所

4、檢測(cè)的淋巴瘤細(xì)胞系Daudi高表達(dá)hsp70有所不同；同時(shí)通過(guò)抗hsp70抗體對(duì)卵巢上皮癌細(xì)胞的封閉實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)抗體封閉前后，諦T細(xì)胞對(duì)其的殺傷活性無(wú)差別，結(jié)果顯示yST細(xì)胞識(shí)別卵巢上皮癌細(xì)胞并非通過(guò)hsp70識(shí)別來(lái)實(shí)現(xiàn)，可能是靶細(xì)胞表面的其他抗原分子所介導(dǎo)的。通過(guò)對(duì)75／ctl3T細(xì)胞體外細(xì)胞毒活性的進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)擴(kuò)增的yS／cc[3TIL、yS／ccl3TAL及外周血丫6／ⅨpT細(xì)胞對(duì)同種異體／自體卵巢上皮癌細(xì)胞均具有顯著且水平相近的

5、細(xì)胞毒活性。通過(guò)裸鼠體內(nèi)抑瘤實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)ySTAL對(duì)同種異體卵巢上皮癌細(xì)胞系SKOV3體內(nèi)生長(zhǎng)有優(yōu)于apTAL的抑制作用。通過(guò)基因掃描技術(shù)，發(fā)現(xiàn)TCRV5各亞型之間的取用頻率有顯著性差異，同時(shí)，卵巢上皮癌患者的TIL、PBMC及正常人PBMC之間表達(dá)TCRV5各亞型也有顯著性差異，卵巢上皮癌患者的PBMC和TIL對(duì)V53的取用頻率多于正常人PBMC，而正常人PBMC對(duì)V52的取用頻率多于卵巢上皮癌患者的PBMC和TIL。通過(guò)對(duì)T淋巴細(xì)胞的