VEGF基因定向轉(zhuǎn)染誘導(dǎo)缺血心肌血管生成及防止血管橋狹窄的實驗研究.pdf

1、該研究的目的旨在構(gòu)建含有編碼165個氨基酸的人VEGFcDNA的表達(dá)載體(phVEGF<,165>),并將其直接轉(zhuǎn)染到血管內(nèi)皮細(xì)胞和心肌組織,觀察轉(zhuǎn)染phVEGF<,165>對體外培養(yǎng)的血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖作用以及對兔心肌組織血管形成的影響.研究的主要內(nèi)容包括三個部分.第一部分含人VEGF<,165>cDNA表達(dá)載體phVEGF<,165>的構(gòu)建目的:構(gòu)建含人VEGF<,165>cDNA表達(dá)載體phVEGF<,165>,建立VEGF基因治

2、療的基礎(chǔ).方法:通過酶切,DNA片斷回收的方法分別獲得編碼165個氨基酸的hVEGFcDNA和真核表達(dá)載體PCR3片斷,在適當(dāng)?shù)臈l件下用T4DNA連接酶把hVEGFcDNA和PCR3片斷連接起來,連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化DH5 α感受態(tài)細(xì)胞并在LB平板上置37℃培養(yǎng).第二部分VEGF基因定向轉(zhuǎn)染防止血管橋狹窄的實驗研究目的:將phVEGF<,165>直接轉(zhuǎn)染到兔頸總動脈腔,觀察VEGF基因?qū)ρ芪呛峡谘ㄐ纬珊蛢?nèi)膜、平滑肌增生的影響.方法:切斷兔頸

3、總動脈,進(jìn)行原位端端吻合,向吻合口血管腔內(nèi)注入真核表達(dá)質(zhì)粒phVEGF<,165>(治療組)和真核載體pcDNA<,3>溶液(對照組),使之在腔內(nèi)滯留30min,應(yīng)用RT-PCR和蛋白印記法檢測吻合口組織的VEGF基因的表達(dá),并進(jìn)行粘附于吻合口同位素標(biāo)記的血小板計數(shù)、吻合口同位素?fù)饺肓亢筒±硇螒B(tài)學(xué)檢測.第三部分VEGF基因定向轉(zhuǎn)染誘導(dǎo)缺血心肌血管生成的實驗研究目的:觀察人血管內(nèi)皮生長因子(hVEGF)質(zhì)粒直接心肌注射對兔急性心肌缺血后側(cè)