Girdin及p-Girdin對乳腺癌細(xì)胞生物學(xué)功能和乳腺癌患者預(yù)后影響的初步探索.pdf

1、目的:研究Girdin及p-Girdin在不同乳腺癌細(xì)胞系中的表達(dá)情況，初步探索其對乳腺癌細(xì)胞生物學(xué)功能和乳腺癌患者預(yù)后的影響。
　　方法:首先通過蛋白免疫印跡法和聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)分別從蛋白和RNA水平檢測Girdin及p-Girdin在不同乳腺癌細(xì)胞系和正常乳腺上皮細(xì)胞中的表達(dá)情況，篩選出高表達(dá)Girdin的乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-231細(xì)胞，然后通過RNA干擾技術(shù)(shRNA)下調(diào)231細(xì)胞中Girdin的表達(dá)。對獲得的下

2、調(diào)細(xì)胞株和對照細(xì)胞株進(jìn)行PAB216磷酸化蛋白芯片檢測。根據(jù)磷酸化蛋白芯片結(jié)果預(yù)測Girdin對Akt信號通路和乳腺癌細(xì)胞生物學(xué)功能的影響，并通過Western blot和一系列功能學(xué)實驗進(jìn)行驗證。同時，利用乳腺癌組織芯片和免疫組織化學(xué)方法，檢測Girdin、p-Girdin(Ser1416)及p-Akt(Ser473/Thr308)在乳腺癌組織中的表達(dá)情況，通過統(tǒng)計學(xué)軟件SPSS分析Girdin、p-Girdin(Ser1416)、p

3、-Akt(Ser473)和p-Akt(Thr308)在組織中的相關(guān)性及它們對乳腺癌患者預(yù)后的影響。
　　結(jié)果:不論是在蛋白水平還是RNA水平，Girdin在預(yù)后較差的三陰性和HER-2過表達(dá)型乳腺癌細(xì)胞系中表達(dá)較高，而在預(yù)后較好的Luminal型細(xì)胞系尤其是LuminalA型細(xì)胞系中表達(dá)較低;p-Girdin在三陰性細(xì)胞系MDA-MB-231細(xì)胞中的表達(dá)明顯高于其他細(xì)胞。通過shRNA技術(shù)成功獲得下調(diào)Girdin表達(dá)的231下調(diào)細(xì)

4、胞株231-Girdin-sh1和空白對照細(xì)胞株231-Girdin-shControl。對比兩種細(xì)胞的磷酸化蛋白芯片結(jié)果及Western blot驗證結(jié)果，提示下調(diào)Girdin后PI3K-Akt信號通路廣泛受到抑制。利用下調(diào)細(xì)胞株和對照細(xì)胞株進(jìn)行細(xì)胞克隆形成、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞遷移、細(xì)胞周期檢測、細(xì)胞增殖實驗等，結(jié)果提示Girdin下調(diào)后影響乳腺癌細(xì)胞克隆形成，細(xì)胞早期凋亡增加，細(xì)胞遷移能力下降，細(xì)胞發(fā)生間質(zhì)上皮轉(zhuǎn)化，細(xì)胞周期傾向于發(fā)生阻

5、滯，而細(xì)胞增殖未見明顯影響。
　　通過免疫組織化學(xué)染色法，觀察到Girdin及p-Girdin在乳腺癌細(xì)胞核和細(xì)胞漿中均有表達(dá)，兩者在乳腺癌組織中的陽性表達(dá)約為30％。我們還發(fā)現(xiàn)Girdin在乳腺癌細(xì)胞中的表達(dá)與p-Akt(Thr308)相關(guān)(P=0.049); p-Girdin在乳腺癌細(xì)胞中的表達(dá)與p-Akt(Ser473)相關(guān)(P=0.013)，與p-Akt(Thr308)有潛在的相關(guān)性(P=0.065)。Kaplan-Mei

6、er曲線提示Girdin對乳腺癌患者生存無明顯影響，而p-Girdin高表達(dá)提示乳腺痛患者預(yù)后較差。通過Cox單因素及多因素分析提示p-Girdin是影響乳腺癌患者無病生存期的一個獨立的不良預(yù)后因素。
　　結(jié)論:Girdin可促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞遷移和克隆形成，促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化，抑制乳腺癌早期細(xì)胞凋亡，有抑制細(xì)胞周期阻滯的傾向，不影響乳腺癌細(xì)胞增殖。磷酸化Girdin高表達(dá)提示乳腺癌患者預(yù)后較差，是一個獨立的影響無病生存期