BMSC聯(lián)全pcDNA6-IL-12質(zhì)粒對小鼠乳腺癌治療作用.pdf

1、目的:制備小鼠骨髓間充質(zhì)干細胞(BMSC)，觀察其在體外對小鼠乳腺癌細胞（EMT-6）生長、凋亡及致瘤性的影響;將BMSC聯(lián)合白細胞介素-12真核表達質(zhì)粒（pcDNA6/IL-12）于乳腺癌荷瘤小鼠瘤體內(nèi)共同注射，探討二者聯(lián)合應(yīng)用對荷瘤小鼠的治療作用。
　　方法:(1)小鼠BMSC的原代培養(yǎng)及其鑒定:采用差速全骨髓貼壁法培養(yǎng)原代小鼠BMSC，采用形態(tài)學和成骨誘導茜素紅染色鈣結(jié)節(jié)法對其鑒定。(2)制備BMSC條件培養(yǎng)基，分別配置成(

2、25％，50％，75％，100％)四種不同濃度。作用EMT-6細胞24，48，72 h后，CCK-8法檢測在不同濃度BMSC條件培養(yǎng)基的作用下，EMT-6細胞增殖的情況;流式細胞術(shù)(Annexin V-FITC/7-AAD雙染色法)檢測在BMSC條件培養(yǎng)基培養(yǎng)條件下EMT-6細胞凋亡的情況。(3) BMSC條件培養(yǎng)基處理過的EMT-6細胞接種昆明種小鼠，于第4、6、8、10、12、14、16 d測量腫瘤的大小。第17 d處死小鼠，取出小

3、鼠腫瘤并稱重，將腫瘤組織制作成石蠟切片，用蘇木精-伊紅(HE)染色及病理學觀察。(4)建立小鼠乳腺癌荷瘤模型，待腫瘤直徑達到5-8 mm（約4d）將小鼠隨機分為4組。分別為陰性對照組（瘤內(nèi)注射PBS）;BMSC組(瘤內(nèi)注射BMSC);IL-12組（瘤內(nèi)注射pcDNA6/IL-12質(zhì)粒）;BMSC聯(lián)合IL-12組（瘤內(nèi)注射BMSC和pcDNA6/IL-12質(zhì)粒）。觀察小鼠腫瘤的生長情況，每隔兩天測量腫瘤的長短徑，計算腫瘤的大小。第17d處

4、死小鼠，無菌條件下剝?nèi)×鲶w和脾臟并稱質(zhì)量，計算脾指數(shù)和抑瘤率。MTT法檢測脾淋巴細胞的增殖活性，LDH法檢測脾淋巴細胞的殺傷活性，HE染色觀察腫瘤組織的病理學改變。
　　結(jié)果:(1)成功培養(yǎng)小鼠BMSC，取P3代細胞進行成骨誘導，茜素紅染色鈣結(jié)節(jié)為陽性。(2)隨著BMSC條件培養(yǎng)基濃度的升高以及作用時間的延長，EMT-6細胞的增殖抑制率由（6.8±0.02）％上升到（29.8±0.05）％，凋亡率由（2.3±0.2）％上升到（25

5、.4±0.3）％。(3) BMSC條件培養(yǎng)基處理的EMT-6細胞致瘤性明顯減弱，腫瘤的體積明顯變小(P＜0.05)。組織病理學觀察可見實驗組腫瘤組織大片壞死。(4) BMSC單獨應(yīng)用及其與pcDNA6/IL-12聯(lián)合應(yīng)用可導致荷瘤小鼠腫瘤的體積縮小(P＜0.01)，脾淋巴細胞增生反應(yīng)及殺傷活性增強(P＜0.05)。腫瘤壞死區(qū)擴大并且有大量炎性細胞浸潤。結(jié)果顯示BMSC聯(lián)合pcDNA6/IL-12應(yīng)用可顯著提高實驗小鼠抗腫瘤細胞免疫力，獲