芽孢桿菌A8對三七莖葉提取物的生物轉(zhuǎn)化作用研究.pdf

1、根據(jù)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)和藥理學(xué)研究結(jié)果顯示，植物三七由于具有鎮(zhèn)痛、止血、降血脂、防治心血管疾病以及消炎解毒等功效，受到廣泛重視及大力開發(fā)，也刺激了三七植物種植業(yè)的發(fā)展。但其開發(fā)與加工主要集中于傳統(tǒng)入藥部位三七根、根莖，三七莖葉通常作為廢物被丟棄，每年的利用率不足其產(chǎn)量的5％。最新研究發(fā)現(xiàn)，從三七莖葉中提取的活性成分為三七莖葉皂苷，其藥理作用與三七根皂苷相似。三七莖葉化學(xué)成分中僅含有原人參二醇型皂苷，幾乎不含原人參三醇型皂苷，這是與三七主根皂苷的最

2、大不同點。從三七莖葉皂苷中能分離出很多具有較好抗腫瘤作用的單體皂苷，但這些單體皂苷含量極少，稱為稀有皂苷。隨著生物技術(shù)的發(fā)展，生物轉(zhuǎn)化技術(shù)已被用于植物稀有皂苷的制備，利用微生物轉(zhuǎn)化法對三七莖葉提取物——三七莖葉皂苷進(jìn)行生物轉(zhuǎn)化，可以提高稀有皂苷的含量。
　　本研究應(yīng)用微生物發(fā)酵法對三七莖葉皂苷進(jìn)行生物轉(zhuǎn)化，分別開展了最佳轉(zhuǎn)化條件優(yōu)化、轉(zhuǎn)化產(chǎn)物分離提取與制備以及轉(zhuǎn)化產(chǎn)物的抗腫瘤作用研究，獲得如下研究結(jié)果:
　　1.利用4種不同

3、微生物對三七莖葉皂苷進(jìn)行轉(zhuǎn)化，通過TLC、HPLC方法檢測每一種生物轉(zhuǎn)化產(chǎn)物的總量，確定從土壤中分離的微生物蠟狀芽孢桿菌A8對三七皂苷的轉(zhuǎn)化效果最好。
　　2.確定了A8轉(zhuǎn)化三七皂苷的最佳條件為:轉(zhuǎn)化時間8d，轉(zhuǎn)化溫度28℃，搖床轉(zhuǎn)數(shù)160r·min-1，轉(zhuǎn)化初始pH值為自然pH5.5，轉(zhuǎn)化底物投加量2％，接菌量15％。在最佳轉(zhuǎn)化條件下，轉(zhuǎn)化產(chǎn)物T的含量是轉(zhuǎn)化前的40.47倍，轉(zhuǎn)化率為62.25％。
　　3.利用乙酸乙酯對總

4、轉(zhuǎn)化產(chǎn)物進(jìn)行超聲提取，其最佳提取條件為:超聲40min、超聲溫度50℃、超聲頻率100kHz、料液比:1∶10。用乙酸乙酯對總轉(zhuǎn)化的產(chǎn)物萃取處理后，得到上、下兩層樣品，編號為T1、T2。
　　4.將三七莖葉總皂苷、A8轉(zhuǎn)化產(chǎn)物T1、T2以及經(jīng)m14菌轉(zhuǎn)化產(chǎn)物M分別對A549、823、MCF-7及HCT116等4種腫瘤細(xì)胞進(jìn)行體外活性抑制試驗，比較其體外活性情況，發(fā)現(xiàn)4種產(chǎn)物對HCT116腫瘤細(xì)胞的抑制率較明顯，其中A8轉(zhuǎn)化產(chǎn)物上層