唑來膦酸刺激人PBMCs體外擴(kuò)增γδT細(xì)胞及其在肝癌非特異性免疫中的作用.pdf

1、第一部分：唑來膦酸刺激人外周血γδT細(xì)胞增殖 目的：探討唑來膦酸刺激人外周血γδT細(xì)胞的增殖作用。 方法：抽取10例健康捐獻(xiàn)者外周血10ml，以密度梯度離心法分離外周血單個(gè)核細(xì)胞。選用第三代雙膦酸鹽類藥物唑來膦酸作為刺激因子，以不同濃度的唑來膦酸聯(lián)合IL-2刺激外周血γδT細(xì)胞增殖。細(xì)胞培養(yǎng)12--14天后，收集細(xì)胞，以流式細(xì)胞儀檢測(cè)相關(guān)表型，<'3>H-TdR摻入法測(cè)定細(xì)胞增殖程度。 結(jié)果：培養(yǎng)12--14天后

2、，外周血γδT細(xì)胞增殖明顯，與對(duì)照組相比較，實(shí)驗(yàn)組γδT表型比例升高顯著(對(duì)照組9.7％、實(shí)驗(yàn)組80.8％)。CD3升高顯著(對(duì)照組71.2％、實(shí)驗(yàn)組96.2％)。<'3>H.TdR摻入法測(cè)定顯示實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞增殖顯著：(空白對(duì)照組CMP值：111；1、實(shí)驗(yàn)組CMP值：17488.6)。在所有唑來膦酸濃度中，以1μM濃度時(shí)，γδT細(xì)胞增殖最為明顯。 結(jié)論：用唑來膦酸能促進(jìn)人外周血γδT細(xì)胞的增殖，得到大量高純度的γδT細(xì)胞。

3、 第二部分：擴(kuò)增的γδT細(xì)胞對(duì)人肝癌細(xì)胞的殺傷效應(yīng) 目的：探討以唑來膦酸刺激增殖的γδT細(xì)胞對(duì)人肝癌細(xì)胞的殺傷作用方法：同實(shí)驗(yàn)一法獲取健康人外周血γδT細(xì)胞，以γδT細(xì)胞作為效應(yīng)細(xì)胞，分別以人肝癌細(xì)胞株SMCC-7721、MHCC-97、HepG2作為靶細(xì)胞。按照效靶比20：1、10：1共同培養(yǎng)48小時(shí)后終止實(shí)驗(yàn)，以SRB法測(cè)定效應(yīng)細(xì)胞對(duì)靶細(xì)胞的殺傷效能。 結(jié)果：γδT細(xì)胞對(duì)三種腫瘤細(xì)胞均表現(xiàn)出強(qiáng)大的殺傷作用，效靶比20