浙貝母病害的檢測(cè)和茯苓多糖對(duì)鱉非特異性免疫的作用.pdf

1、浙貝母是百合科多年生鱗莖類(lèi)藥用植物，具有清熱、潤(rùn)肺、散結(jié)、止咳和化痰等功能。寧波市是浙貝母的主產(chǎn)區(qū)，田間栽培長(zhǎng)期用球莖做種，容易受病菌感染、腐爛，影響產(chǎn)量與品質(zhì)。本工作建立了一種簡(jiǎn)單、經(jīng)濟(jì)、快速并適合于浙貝母RNA的提取方法，即氯化鋰沉淀法。另外異硫氰酸胍、Tris-phenol等方法也能有效地從浙貝母組織中提取出RNA。依據(jù)當(dāng)?shù)爻Ｒ?jiàn)或者容易侵然百合科的病毒為依據(jù)，合成10對(duì)引物；首次采用RT-PCR對(duì)種植區(qū)內(nèi)隨機(jī)采集的浙貝母的葉片以及

2、離體條件下培養(yǎng)的浙貝母組織進(jìn)行了病毒檢測(cè)。RT-PCR檢測(cè)結(jié)果表明，野外的樣本攜帶馬鈴薯卷葉病毒和百合斑駁病毒，分別擴(kuò)增到336 bp和513 bp的特異性條帶，與預(yù)期的片斷大小一致；但是在組織培養(yǎng)的外植體中未發(fā)現(xiàn)PLRV和LMoV。這兩種病毒在大田中的分布頻率分別為40％和12.5％。 此外，采用雙向電泳技術(shù)（2-D）結(jié)合組織培養(yǎng)技術(shù)初步分析了被真菌感染的浙貝母球莖的蛋白質(zhì)表達(dá)變化。SDS-PAGE電泳表明，被真菌感染了的浙貝

3、母樣本比未感染的浙貝母樣本出現(xiàn)了兩條明顯條帶，約為35.0 kDa和25.0 kDa。同時(shí)，前者中的三條蛋白質(zhì)帶（分別約30.0，20.0,16.0 kDa）的豐度較后者要低。雙向電泳后，經(jīng)PDQuest軟件分析，發(fā)現(xiàn)被感染的球莖塊與未被感染的球莖在蛋白質(zhì)表達(dá)有明顯差異。被真菌感染的樣本出現(xiàn)6個(gè)新的蛋白質(zhì)點(diǎn)，而有4個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)只在未被真菌感染的樣本中表達(dá)。另外，相對(duì)于健康的樣本，被真菌感染的浙貝母球莖塊，有7個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)表達(dá)量明顯升高，而有

4、10個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)表達(dá)量下降。 茯苓為常用草藥，是多孔菌科真菌茯苓的干燥菌核。茯苓多糖具有抑菌，增強(qiáng)免疫力，抑制腫瘤生長(zhǎng)和清除自由基等功效。本實(shí)驗(yàn)采用口服的方式，初步研究了茯苓多糖對(duì)中華鱉非特異性免疫功能影響的試驗(yàn)結(jié)果。試驗(yàn)共分為3個(gè)組，在中華鱉飼料中添加20.0mg／kg．B．W．茯苓多糖作為試驗(yàn)組，將添加500.0 mg／kg.B.W.免疫多糖（酵母細(xì)胞壁）作為免疫刺激劑對(duì)照組，以投喂未添加茯苓多糖和免疫多糖（酵母細(xì)胞壁）飼料的

5、作為空白對(duì)照組。連續(xù)投喂28 d后，取中華鱉的血液，測(cè)定了中華鱉血液中自細(xì)胞的吞噬活性、血清溶菌活力和補(bǔ)體活性。研究結(jié)果表明，在中華鱉飼料中添加茯苓多糖和免疫多糖（酵母細(xì)胞壁）能顯著提高中華鱉白細(xì)胞的吞噬活性，而2個(gè)試驗(yàn)組之間中華鱉血液中自細(xì)胞的吞噬活性沒(méi)有顯著差異，2個(gè)試驗(yàn)組中華鱉血清中補(bǔ)體C3和C4的活性與對(duì)照組之間出現(xiàn)顯著差異，而試驗(yàn)組之間無(wú)顯著性差異。研究結(jié)果證明在中華鱉餌料中添加茯苓多糖和免疫多糖（酵母細(xì)胞壁）對(duì)中華鱉的非特異