Isolation and Characterization of Lactic Acid Bacteria and Their Effect on the Fermentation Quality of Different Silages at Hig.pdf

1、象草(Pennisetum purpurem Sch.)，黑麥草(Lolium multiflorum Lam.)和苜蓿(Medicagosativa L.)廣泛種植于熱帶和亞熱帶地區(qū)，是調(diào)制青貯飼料的常用牧草?；睒洌⊿ophoraJaponicaL.）葉子產(chǎn)量大，耐低溫，廣泛種植于溫帶地區(qū)，是高蛋白青貯原料。一般添加乳酸菌能促進(jìn)乳酸發(fā)酵，降低pH，抑制丁酸發(fā)酵，提高青貯發(fā)酵品質(zhì)。乳酸菌的生長和產(chǎn)乳酸活性受溫度的影響，夏季高溫(30～5

2、0℃)常使青貯飼料乳酸少，丁酸多;冬春季低溫(5～15℃)常使青貯飼料乳酸發(fā)酵不足，不能有效地抑制有害微生物的活性。植物附著的乳酸菌中含有耐高溫、耐低溫、產(chǎn)乳酸活性強(qiáng)的乳酸菌，能提高高溫或低溫環(huán)境下青貯飼料的發(fā)酵品質(zhì)。本研究旨在從牧草中篩選出耐高溫、耐低溫和產(chǎn)乳酸活性強(qiáng)的乳酸菌;根據(jù)其生理生化特性和16S rDNA序列進(jìn)行分子鑒定;在高溫和低溫青貯條件下，研究篩選出的乳酸菌對(duì)象草、黑麥草、苜蓿和槐葉發(fā)酵品質(zhì)的影響。該研究的開展為乳酸菌種

3、質(zhì)資源的開發(fā)利用提供了理論依據(jù)。主要研究內(nèi)容分為五個(gè)部分:
　　1、乳酸菌的分離、特性和鑒定
　　篩選出了6株乳酸菌，命名為GG6，GG7，GG13，GG26，LIG5和M1。生理生化試驗(yàn)表明，6株乳酸菌均屬于同型發(fā)酵乳酸菌，能夠在低pH(3.5)和高濃度NaCl(6.5％)條件下生長。GG6， GG7， LIG5和MI能夠在10℃和15℃生長，GG13和GG26能夠在50℃生長。通過16S rDNA序列相似性分析，GG6和

4、GG26鑒定為鼠李糖乳桿菌(Lactobacillus rhamnosus)，GG7和MI鑒定為植物乳桿菌（Lactobacillusplantarum），GG13鑒定為乳酸片球菌（Pediococuss acidilactici），LIG5鑒定為干酪乳桿菌(Lactobacillus casei)。
　　2、高溫條件下GG13和GG26對(duì)象草青貯飼料發(fā)酵品質(zhì)的影響
　　為評(píng)價(jià)高溫條件下GG13和GG26提高象草青貯飼料發(fā)酵

5、品質(zhì)的效果，試驗(yàn)設(shè)對(duì)照組、三個(gè)添加劑組(商品型乳酸菌添加劑(CB)、GG13和GG26）和三個(gè)溫度處理（30℃，40℃和50℃）。結(jié)果表明:30℃青貯50天后，與對(duì)照組相比，CB、GG13和GG26的pH、乙酸和氨態(tài)氮含量顯著降低（P＜0.05），乳酸含量顯著增加（P＜0.05）。40℃青貯，與對(duì)照組相比，CB、GG13和GG26的氨態(tài)氮含量顯著降低(P＜0.05)。50℃青貯，對(duì)照和CB組有較高的pH和丁酸含量，與對(duì)照組和CB相比，G

6、G13和GG26的pH和丁酸含量顯著降低（P＜0.05），乳酸含量顯著增加（P＜0.05）;與GG26相比，GG13的pH和丁酸含量最低(P＜0.05)，乳酸含量最高（P＜0.05），發(fā)酵品質(zhì)最好。
　　3、低溫條件下LIG5和M1對(duì)意大利黑麥草青貯飼料發(fā)酵品質(zhì)的影響
　　為評(píng)價(jià)低溫條件下LIG5和M1提高意大利黑麥草青貯飼料發(fā)酵品質(zhì)的效果，試驗(yàn)設(shè)對(duì)照組、三個(gè)添加劑組（CB、LIG5和M1）和三個(gè)溫度處理（5℃，10℃和15

7、℃）。結(jié)果表明:5℃青貯60天后，對(duì)照組和CB的pH和丁酸含量較高，與對(duì)照組相比，LIG5和M1的pH、丁酸和氨態(tài)氮含量顯著降低（P＜0.05），提高了發(fā)酵品質(zhì)。10℃和15℃青貯，與對(duì)照組相比，CB、LIG5和MI的丁酸和氨態(tài)氮含量顯著降低（P＜0.05），與CB和M1相比，LIG5的丁酸和氨態(tài)氮含量最低（P＜0.05），乳酸含量和干物質(zhì)回收率最高（P＜0.05），發(fā)酵品質(zhì)最好。
　　4、低溫條件下GG6和GG7對(duì)苜蓿青貯飼料發(fā)

8、酵品質(zhì)的影響
　　為評(píng)價(jià)低溫條件下GG6和GG7提高苜蓿青貯飼料發(fā)酵品質(zhì)的效果，試驗(yàn)設(shè)對(duì)照組、三個(gè)添加劑組（CB、GG6和GG7）和三個(gè)溫度處理（5℃，10℃和15℃）。結(jié)果表明:5℃青貯60天后，所有處理組均顯示較低的乳酸含量，較高的pH，未充分發(fā)酵。10℃青貯，與對(duì)照組相比，CB、GG6和GG7均降低了pH和氨態(tài)含量（P＜0.05）或P＞0.05)，增加了乳酸含量（P＜0.05或P＞0.05）。15℃青貯，與對(duì)照組相比，CB和

9、GG6均降低了pH和氨態(tài)氮含量（P＜0.05或P＞0.05），增加了乳酸含量（P＜0.05或P＞0.05），提高了發(fā)酵品質(zhì)。
　　5、低溫條件下GG6和GG7對(duì)槐樹葉青貯飼料發(fā)酵品質(zhì)的影響
　　為評(píng)價(jià)低溫條件下GG6和GG7提高槐樹葉青貯飼料發(fā)酵品質(zhì)的效果，試驗(yàn)設(shè)對(duì)照組、三個(gè)添加劑組（CB、GG6和GG7）和三個(gè)溫度處理（5℃，10℃和15℃）。結(jié)果表明:5℃青貯60天后，對(duì)照組、CB、GG6和GG7的乳酸含量低，乳酸發(fā)酵不

10、足。10℃和15℃青貯,與對(duì)照組相比，CB、GG6和GG7的pH和酒精含量顯著降低(P＜0.05)，乳酸含量顯著增加（P＜0.05），與CB相比，GG6和GG7的pH顯著降低(P＜0.05)，乳酸含量顯著增加(P＜0.05)，提高了發(fā)酵品質(zhì)。
　　綜上所述，在30℃，40℃和50℃，乳酸菌GG13提高象草青貯飼料發(fā)酵品質(zhì)的效果最好。在5℃，10℃和15℃，乳酸菌LIG5提高黑麥草青貯飼料發(fā)酵品質(zhì)的效果最好。在10℃和15℃，CB、