斑馬魚(yú)慢性心衰模型的構(gòu)建及其肌鈣蛋白基因tnnt2a時(shí)空表達(dá)研究.pdf

1、[目的]
　　用ISO藥浴斑馬魚(yú)，構(gòu)建斑馬魚(yú)心氣虛證慢性心衰模型，并探究該模型體內(nèi)tnnt2a的時(shí)空表達(dá)。
　　[方法]
　　用不同濃度的鹽酸異丙腎上腺素(isoproterenol，ISO)持續(xù)多時(shí)間點(diǎn)藥浴斑馬魚(yú)，通過(guò)對(duì)死亡率和心率的統(tǒng)計(jì)分析，以確定合適的藥物濃度和用藥時(shí)間，從而構(gòu)建斑馬魚(yú)心氣虛證慢性心衰模型;運(yùn)用視頻分析法間接測(cè)量斑馬魚(yú)的心功能指標(biāo)，評(píng)價(jià)該模型的心功能變化情況;通過(guò)合成地高辛標(biāo)記的斑馬魚(yú)心肌肌鈣蛋白

2、基因（cardiac troponin T type2a，tnnt2a）反義RNA探針，運(yùn)用斑馬魚(yú)整體原位雜交技術(shù)進(jìn)行tnnt2a的表達(dá)定位，雙標(biāo)準(zhǔn)曲線相對(duì)定量qPCR法探究該心衰模型tnnt2a的表達(dá)水平。
　　[結(jié)果]
　　1.ISO對(duì)斑馬魚(yú)心率的影響:ISO濃度為0.015、0.020 mg/ml的處理組斑馬魚(yú)心率在24～48 hpf區(qū)間內(nèi)的心率與對(duì)照組無(wú)統(tǒng)計(jì)差異，48 hpf之后ISO處理組心率均明顯下降，各時(shí)間點(diǎn)與

3、對(duì)照組比有顯著差異(P＜0.01)，57 hpf后心率開(kāi)始回升。
　　2.斑馬魚(yú)心功能改變:以0.020 mg/ml ISO藥浴斑馬魚(yú)構(gòu)建心衰模型，72 hpf斑馬魚(yú)心功能指標(biāo)心室表面積改變率(FAC)、心室短軸縮短率(FSs)及長(zhǎng)軸縮短率(FSL)均下降，其中FAC、FSL有顯著差異（P＜0.01），F(xiàn)Ss有統(tǒng)計(jì)差異（P＜0.05）。
　　3.斑馬魚(yú)tnnt2a的表達(dá)定位:用地高辛標(biāo)記的tnnt2a RNA探針進(jìn)行整體原位

4、雜交，結(jié)果顯示tnnt2a特異表達(dá)于斑馬魚(yú)心臟，且心室表達(dá)量高于心房。
　　4.斑馬魚(yú)tnnt2a的表達(dá)水平:雙標(biāo)準(zhǔn)曲線相對(duì)定量qPCR結(jié)果顯示經(jīng)ISO藥浴后的模型組斑馬魚(yú)tnnt2a在36、48、60、72、96 hpf5個(gè)時(shí)間點(diǎn)的表達(dá)水平顯著增高(P＜0.01)。
　　[結(jié)論]
　　1.模型構(gòu)建方案:用濃度為0.020 mg/ml的ISO分別在24、30、36、48、54 hpf五個(gè)時(shí)間段連續(xù)藥浴斑馬魚(yú)，可構(gòu)建斑馬