白芍有效成分經(jīng)皮微乳的抗炎鎮(zhèn)痛作用及其藥效物質(zhì)基礎(chǔ).pdf

1、1目的1.1探討微乳用作中藥有效成分載藥體系的可行性根據(jù)微乳自身的特點，制備口服和經(jīng)皮給藥的微乳，探討微乳用作中藥有效成分、有效部位以及組分配伍復方載體系統(tǒng)的可行性。 1.2評價微乳用作中藥有效成分經(jīng)皮吸收載藥體系的效果研制白芍總苷經(jīng)皮微乳、芍藥甘草有效組分配伍的經(jīng)皮微乳(簡稱芍甘經(jīng)皮微乳)，觀察其透皮吸收特性，并探討其抗炎鎮(zhèn)痛作用的機制以及微乳促進藥物透皮吸收的機理。 1.3探討白芍總苷藥理作用的相關(guān)機制及白芍的藥效物

2、質(zhì)基礎(chǔ) 2方法2.1通過相圖研究及大鼠經(jīng)皮吸收實驗進行微乳處方篩選，確定表面活性劑、助表面活性劑、油相、水相以及藥物的比例。用透射電子顯微鏡和激光粒度儀測定體系的形態(tài)、粒徑和分布。用高效液相色譜法(HPLC)測定不同條件下微乳中芍藥苷的含量，考察微乳的穩(wěn)定性。 2.2用透皮擴散試驗儀收集微乳透皮接受液，用高效液相色譜法測定透皮接受液中芍藥苷的含量并計算離體透皮速率常數(shù)，觀察微乳體外滲透大鼠皮膚動力學的變化，考察透皮吸收特

3、性。比較不同制劑在透皮吸收方面的差異以及不同濃度氮酮對芍藥苷透皮效果的影響。 2.3用家兔頸動脈插管取血法采集含藥血樣，用高效液相色譜法測定經(jīng)皮給藥和口服給藥后芍藥苷的血藥濃度，比較不同劑型、不同給藥方式的血藥濃度變化的特點。 2.4用弗氏完全佐劑建立大白鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎(AA)模型，觀察足跖腫脹度、足跖腫脹抑制率、關(guān)節(jié)炎指數(shù)、繼發(fā)性前肢腫脹、耳部紅斑和尾部結(jié)節(jié)出現(xiàn)率以及踝關(guān)節(jié)病理改變等指標。用甲醛致痛法、醋酸扭體測痛法和

4、熱板測痛法觀察微乳的鎮(zhèn)痛作用。 2.5用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測大鼠血清中相關(guān)細胞因子的水平，探討白芍總苷抗炎、鎮(zhèn)痛的機制。結(jié)合文獻研究，探討白芍藥理作用的物質(zhì)基礎(chǔ)。 2.6通過皮膚急性毒性試驗、皮膚刺激性試驗和皮膚長期毒性試驗等，觀察白芍總苷經(jīng)皮微乳對家兔完整皮膚或破損皮膚的影響。 3結(jié)果與結(jié)論3.1微乳是中藥有效成分的良好載藥體系 3.1.1白芍總苷和穿心蓮內(nèi)酯可分別溶于不同微乳中，說明微乳

5、可用作易溶或難溶性中藥成分的載藥體系。 3.1.2穿心蓮內(nèi)酯、白芍總苷以及通絡救腦成分(三七總皂甙、梔子苷)可分別溶于口服或經(jīng)皮微乳中，說明微乳可用作不同給藥途徑藥物的載藥體系。 3.1.3芍藥苷、白芍總苷和芍甘配伍組分可溶于由聚山梨酯80、1，2-丙二醇、油酸和水配制成的同一微乳中。說明同一微乳可用作中藥有效成分、中藥有效部位或組分配伍復方的載藥體系。 3.2白芍有效成分經(jīng)皮微乳具有較好的治療效果3.2.1通過

6、相圖研究及大鼠經(jīng)皮吸收實驗篩選得到吸收較好的微乳處方。微乳澄清、均一、透明；為規(guī)則的圓球形，分散良好，無油滴、未分層、流動性較佳。兩種含藥微乳平均粒徑分別為83.80nm和89.70nm，多分散性系數(shù)(PDI)分別為0.191和0.203，微乳粒徑分布均勻。在不同條件下保持澄清透明狀態(tài)，未見分層、絮凝和破乳現(xiàn)象，芍藥苷含量、微乳粒徑及其分布無明顯改變。所制備的微乳制劑是穩(wěn)定性良好的載藥體系。3.2.2不同濃度微乳的透皮能力不同，高濃度微

7、乳的累計滲透量和透皮速率常數(shù)較高。在同一藥物濃度下，包含不同組分的載藥體系的透皮能力不同。不同載藥體系的透皮接受液中芍藥苷的累計滲透量和透皮速率常數(shù)不同，微乳中芍藥苷的透皮速率較高。氮酮可影響微乳中芍藥苷的透皮吸收，不同濃度氮酮對其透皮速率常數(shù)的影響不同，在本實驗濃度范圍內(nèi)，氮酮濃度為3％時表現(xiàn)出最大的透皮速率常數(shù)。選擇具有透皮促進作用的微乳作為白芍總苷的載藥體系并加用促透劑，增強了白芍總苷經(jīng)皮吸收的效果。 3.2.3微乳經(jīng)皮給

8、藥的特點是血藥濃度上升較為緩慢，隨時間延長則血藥濃度逐步平穩(wěn)上升；微乳中的芍藥苷能較好地通過皮膚吸收，在持續(xù)使用時血藥濃度能達到一定的水平。而口服給藥的特點是6h時出現(xiàn)芍藥苷的血藥濃度高峰，隨后很快下降，至18h時已降至較低水平。制成微乳經(jīng)皮給藥后藥物的生物利用度提高了32.11％。 3.2.4佐劑性關(guān)節(jié)炎模型大鼠出現(xiàn)原發(fā)性損害，大鼠足跖(右足跖或左足跖)、前肢腫脹明顯；繼而出現(xiàn)繼發(fā)性損害，足跖、前肢腫脹更加明顯，大鼠右足跖(或

9、左足跖)和前肢腫脹程度、大鼠耳部紅斑、尾部結(jié)節(jié)均明顯增高或增加。在致炎后第24天出現(xiàn)滑膜炎和以關(guān)節(jié)囊腫脹為特征的關(guān)節(jié)周圍炎癥。與正常對照組比較，致炎大鼠血清中PGE2、TNF-α水平升高，而IL-4、IL-8水平降低。白芍總苷經(jīng)皮微乳對上述癥狀均有明顯改善，其對Freund's完全佐劑引起的原發(fā)病變具有預防作用，對繼發(fā)病變具有預防和治療作用。白芍總苷經(jīng)皮微乳能下調(diào)PGE2、TNF-α水平，上調(diào)IL-4、IL-10水平，通過抑制炎癥介質(zhì)釋

10、放而抑制促炎效應，通過促進抗炎因子生成而增強抗炎效應，調(diào)節(jié)TH1/TH2細胞因子平衡，這可能是該藥抗炎作用的機制之一。白芍總苷經(jīng)皮微乳和芍甘經(jīng)皮微乳均能抑制小鼠熱板致痛效應，顯著減少醋酸誘發(fā)的小鼠扭體反應次數(shù)，后者尚能明顯抑制甲醛導致的大鼠兩相疼痛反應，其鎮(zhèn)痛作用可能與抑制PGE2、TNF-α釋放有關(guān)。 3.2.5白芍總苷經(jīng)皮微乳的皮膚急性毒性試驗、皮膚刺激性試驗和皮膚長期毒性試驗中均未發(fā)現(xiàn)刺激、過敏和毒性反應，說明白芍總苷經(jīng)皮

11、微乳是一種安全、有效的藥物。 4白芍總苷微乳透皮吸收的相關(guān)機制及其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)4.1白芍總苷微乳透皮吸收的相關(guān)機制從本實驗研究結(jié)果分析，微乳促進白芍總苷透皮吸收的作用可能與以下兩方面因素有關(guān)：一是微乳本身具有促進藥物透皮吸收的特點，二是本載藥體系組分構(gòu)成的二組分系統(tǒng)，以及其與氮酮組成的三組分系統(tǒng)有促進透皮吸收作用。 4.1.1微乳載藥體系促進白芍總苷透皮吸收微乳用作白芍總苷經(jīng)皮給藥的載藥體系時具有較強的促滲作用，主要機制

12、包括：①微乳載藥體系中粒子較小，增加與角質(zhì)層相互作用的機會，從增加藥物的經(jīng)皮吸收。 ②微乳具有較好的流動性，系統(tǒng)中藥物能以不受限制的狀態(tài)自由流動，藥物可以順利透入皮膚吸收。 ③微乳的表面張力較低，易于潤濕皮膚，親水部分可水化角質(zhì)層，使角質(zhì)層的結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，促進藥物經(jīng)皮進入體循環(huán)。 ④微乳的疏水部分可與角質(zhì)層相互作用，干擾脂質(zhì)雙分子層結(jié)構(gòu)。上述作用共同增強白芍總苷在角質(zhì)層的透過性，有利于其經(jīng)皮吸收。 4.1

13、.2微乳組方中的二組分系統(tǒng)促進白芍總苷透皮吸收本微乳的組方中包括油酸和丙二醇兩種常用的促透劑。 ①油酸可破壞角質(zhì)層類脂膜結(jié)構(gòu)，影響脂質(zhì)雙分子層排列的致密性和流動性，降低表皮屏障作用、增加表皮通透性，有利于藥物穿過角質(zhì)層，從而增加藥物的滲透量。 ②丙二醇能使角質(zhì)層中角蛋白溶化，占據(jù)蛋白質(zhì)的氫鍵結(jié)合部位，減少藥物與組織間的結(jié)合，增加藥物在角質(zhì)層中的溶解度，顯著提高藥物的滲透速率。 ③當丙二醇與油酸合用時，可以延長其在

14、角質(zhì)層中的滯留時間從而延長促滲作用的持續(xù)時間。氮酮促進微乳中芍藥苷的透皮吸收，丙二醇、油酸與氮酮合用的三組分系統(tǒng)提高釋藥速率，增加有效成分的透皮吸收，顯示出較好的促透協(xié)同作用。本實驗中白芍總苷微乳的透皮速率高于其水溶液，表明微乳促進白芍總苷經(jīng)皮吸收的效果與此載藥體系中丙二醇、油酸的促透作用有關(guān)。 4.2白芍總苷功效的物質(zhì)基礎(chǔ)白芍總苷能夠抑制致炎因子如PGE2、TNF-α、IFN-γ、IL-1、LTB等的釋放，促進抗炎因子如IL-