長(zhǎng)白山區(qū)北五味子種質(zhì)資源遺傳多樣性研究.pdf

1、五味子為木蘭科植物，分為北五味子[Schisandra chinensis(Turcz.)Baill.]和南五味子（Schisandra sphenanthera Rehd.et Wils.）。傳統(tǒng)的中醫(yī)學(xué)觀點(diǎn)認(rèn)為北五味子質(zhì)量?jī)?yōu)于南五味子，所以北五味子種質(zhì)資源的保存和利用，對(duì)人類選育高產(chǎn)、優(yōu)質(zhì)、抗逆新品種具有重要的意義。為了分析北五味子的遺傳背景，更好的發(fā)揮北五味子的資源優(yōu)勢(shì)，本實(shí)驗(yàn)采用RAPD方法從分子水平上研究北五味子的親緣關(guān)系，為

2、北五味子的育種工作提供一定的理論基礎(chǔ)。本研究對(duì)長(zhǎng)白山區(qū)北五味子的56個(gè)地區(qū)的不同群體間和群體內(nèi)的種質(zhì)資源進(jìn)行遺傳多樣性分析。主要結(jié)果如下：
　　1.本研究采用四種北五味子基因組DNA提取純化方法，以基因組DNA的OD260/OD280比值為標(biāo)準(zhǔn)，選擇了一種快速、簡(jiǎn)便、經(jīng)濟(jì)的北五味子基因組DNA的提取純化方法。結(jié)果表明，本研究中所采用的改良的CTAB方法對(duì)于提高北五味子基因組DNA的質(zhì)量是十分有益的。
　　2.以野生北五味子嫩

3、葉為實(shí)驗(yàn)材料，對(duì)北五味子RAPD分析中影響PCR擴(kuò)增效果的主要因素進(jìn)行了研究，確定了北五味子RAPD的最適反應(yīng)體系。PCR擴(kuò)增的體系（總體積為25μl）為：模板DNA20ng，dNTPs200μmol/L，引物0.3μmol/L，Mg2+為2mmol/L，Taq聚合酶1Unit，10×Buffer2.5ul。PCR擴(kuò)增程序?yàn)椋?4℃預(yù)變性5分鐘,94℃變性1分鐘,40℃退火1分鐘72℃延伸90秒。共40個(gè)循環(huán),72℃最后延伸5分鐘,4℃

4、保存。
　　3.利用RAPD技術(shù)對(duì)長(zhǎng)白山區(qū)56個(gè)野生北五味子群體間進(jìn)行了遺傳關(guān)系研究。從所篩選的100個(gè)UBC隨機(jī)引物中選取20個(gè)對(duì)56個(gè)樣品的基因組DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增,每條引物均能擴(kuò)增出清晰的條帶，共擴(kuò)增出125條帶，其中62個(gè)為多態(tài)性條帶，平均每條引物擴(kuò)增條帶數(shù)為6.25，多態(tài)率為49.6％。借助于DPS9.50統(tǒng)計(jì)分析軟件分析RAPD表型數(shù)據(jù)矩陣，計(jì)算個(gè)樣品間的遺傳距離，建立親緣關(guān)系聚類樹狀圖，依據(jù)此圖，56個(gè)北五味子群體

5、間種質(zhì)資源的遺傳距離為0-0.56。其中15、16、18、21、22、23、27、28之間的遺傳距離為0。二道白河和敦化大山的遺傳距離最遠(yuǎn)，其遺傳距離為0.56。以遺傳距離0.35為標(biāo)準(zhǔn)聚類為6大類。第一類群包括12份材料，以敦化地區(qū)為主；第二類群包括3份料，以樺甸地區(qū)為主；第三類群包括8份材料，以汪清地區(qū)為主；第四類群包括14份材料，以跤河地區(qū)為主；第五類群包括8份材料，以舒蘭地區(qū)為主；第六類群包括11份材料，以安圖地區(qū)為主。

6、　　4．通過對(duì)延吉依蘭北五味子群體內(nèi)的RAPD分析，結(jié)果表明，利用20條隨機(jī)引物對(duì)北五味子群體內(nèi)的30個(gè)種質(zhì)資源進(jìn)行PCR擴(kuò)增，每條引物均能擴(kuò)增出清晰的條帶，共擴(kuò)增出124條帶，其中51條為多態(tài)性條帶，平均每條引物擴(kuò)增條帶數(shù)為6.2，多態(tài)率為41.12%。借助于DPS9.50統(tǒng)計(jì)分析軟件分析RAPD表型數(shù)據(jù)矩陣，計(jì)算各樣品間的遺傳距離，建立親緣關(guān)系聚類樹狀圖，并且進(jìn)一步利用DPS9.50統(tǒng)計(jì)分析軟件分析北五味子群體內(nèi)的Shannon多樣