長白山區(qū)大豆根瘤菌遺傳多樣性的研究.pdf

1、大豆根瘤菌是一種活的微生物，與豆科植物共生。豆科植物通過光合作用制造的有機物供給根瘤菌；大豆根瘤菌的生物固氮作用是豆科植物中固氮效率最高的。利用根瘤菌的生物固氮可以減少種植大豆的施肥量，培肥地力，改善土壤。
　　本研究的主要材料是來自長白山區(qū)不同地區(qū)大豆植株的根瘤菌，通過 YMA培養(yǎng)基的連續(xù)多代培養(yǎng)，分離純化出大豆根瘤菌。為了研究長白山區(qū)大豆根瘤菌的遺傳多樣性，主要對根瘤菌保守基因 recA、共生質(zhì)粒基因的固氮基因 nif進行研究

2、，通過PCR瓊脂糖凝膠回收測序進行多樣性分析。
　　通過研究得出如下結(jié)論：
　　1、通過對YMA培養(yǎng)基的優(yōu)化，篩選出適于長白山區(qū)大豆根瘤菌生長的YMA培養(yǎng)基，其配比為甘露醇10g，酵母膏4g，瓊脂粉16g，MgSO40.2g，NaCl0.3g，K2HPO40.25g，KH2PO40.25g，PH=7.1；
　　2、每個根瘤中所包含的根瘤菌為一種根瘤菌，通過YMA培養(yǎng)基對根瘤菌的連續(xù)繼代培養(yǎng)，可以將根瘤菌分離純化；

3、>　　3、連續(xù)多代在YMA培養(yǎng)基上培養(yǎng)大豆根瘤菌其最佳的稀釋濃度為1/2-7;
　　4、儲存于-80℃下的大豆根瘤菌的單克隆體，在甘油中保存的最適濃度為75％；
　　5、經(jīng)革蘭氏染色觀察大豆根瘤菌長度約為1μm，桿狀，為革蘭氏陰性菌；
　　6、對PCR反應(yīng)程序進行了優(yōu)化，得到最優(yōu)反應(yīng)程序為：預(yù)變性95℃2min，進入循環(huán)系統(tǒng)，共35個循環(huán)，變性94℃1min，退火63℃1min，延伸72℃2min，循環(huán)結(jié)束，72℃最后

4、延伸5min；
　　7、通過以固氮基因 nif所構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹可以看出，長白山區(qū)五個地區(qū)的大豆根瘤菌是從兩個方向進化的。C-7、D-1、A-5在一個大的分支上，可以看成一個屬，說明延吉、二道、和龍有相同屬的大豆根瘤菌存在。A-2、C-4、E-3、C-2、A-3在一個大的分支上可以看成是一個屬，延吉、和龍安圖有相同屬的大豆根瘤菌。D-2、A-4、D-4、D-6、E-6在一個大的分支上可以看成是一個屬，延吉、和龍、安圖有相同屬的大豆

5、根瘤菌。 B-4、B-1、E-2、D-1、D-3、E-5、A-1、A-5、B-2、B-3在一個大的分支上可以看成是一個屬的，延吉、龍井、二道、安圖有相同屬的大豆根瘤菌存在，龍井地區(qū)的樣品同屬于一個屬。E-3與Sinorhizobium sp.在同一分支上，可以看成是同一種，同屬中華根瘤菌；
　　8、通過以管家基因recA所構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹可以看出，根瘤菌是從兩個方向進化的。E-2、A-3、C-1同在一個分支上，可以看成是一個屬，即