大蒜素對(duì)家蠶病原真菌的抑制作用及機(jī)理研究.pdf

1、為了解決在蠶病防治中所造成的環(huán)境污染問題,以開發(fā)植物源藥劑為目的,探明大蒜素的抑菌功能,本文從對(duì)家蠶具有高毒力菌株的篩選開始,系統(tǒng)研究了大蒜素對(duì)家蠶具有高毒力病原白僵菌的抑制作用,探討了外界條件對(duì)大蒜素穩(wěn)定性的影響,并從大蒜素對(duì)真菌膜功能的影響方面進(jìn)行了抑菌機(jī)理的研究。實(shí)驗(yàn)結(jié)果將為開發(fā)大蒜素為新型蠶藥提供依據(jù)。 1.幾種對(duì)家蠶高毒力白僵菌菌株的篩選。 以分離的5株白僵菌菌株為材料,對(duì)其營養(yǎng)生長量、產(chǎn)孢量和致病力等生物學(xué)指

2、標(biāo)進(jìn)行了綜合比較,結(jié)果表明：不同菌株的各個(gè)指標(biāo)均存在差異,其中B07-2營養(yǎng)生長量最快,產(chǎn)孢量最高,10d內(nèi)對(duì)家蠶的致病率為98.18％,其對(duì)家蠶的致死中時(shí)LT50為5.09d,致死中濃度LC50為2.69×106孢子/mL。 2.大蒜素對(duì)家蠶病原真菌(B07-2)的抑制作用。 通過對(duì)大蒜素對(duì)家蠶病原白僵菌B07-2的孢子萌發(fā)和菌落擴(kuò)散的抑制作用的測(cè)定,得出大蒜素對(duì)家蠶病原白僵菌的抑制作用隨濃度的升高而升高,在大蒜素濃度

3、為10μL/mL時(shí),抑制作用最強(qiáng),3d的抑制率分別為92.67％和91.07％,抑制中濃度IC50分別為2.79μL/mL和1.41μL/mL。 通過對(duì)最小抑制濃度(MIC)和最小致死濃度(MLC)的測(cè)定,得出大蒜素對(duì)白僵菌Bb07-2的MIC和MLC分別為5.00μL/mL和7.50μL/mL。 3.酸堿度和溫度對(duì)大蒜素抑制效果的影響。 通過pH值和溫度對(duì)大蒜素抑菌效果的影響測(cè)定得出,大蒜素在中性和酸性(pH≤

4、7)和溫度低于60℃條件下的抑菌效果穩(wěn)定,在堿性(pH＞7)和高溫(＞80℃)環(huán)境下,抑菌效果明顯降低,說明大蒜素是對(duì)堿和熱不穩(wěn)定的物質(zhì)。 4.大蒜素對(duì)家蠶病原白僵菌(B07-2)抑制機(jī)理研究。 為了探討大蒜素對(duì)真菌膜功能的影響,分析了大蒜素對(duì)真菌在生長過程中吸收利用營養(yǎng)物質(zhì)速率的影響、大蒜素濃度與原生質(zhì)膜傷害率的關(guān)系、大蒜素對(duì)白僵菌細(xì)胞離子運(yùn)輸和離子梯度維系能力的影響,用考馬斯亮藍(lán)G-250染色法、3,5-二硝基水楊酸

5、比色法、外滲電導(dǎo)法以及ATPase測(cè)試盒分別進(jìn)行測(cè)定,結(jié)果表明：大蒜素處理后的病原白僵菌在生長過程中對(duì)蛋白質(zhì)和糖的吸收利用速率比對(duì)照分別降低了64.83％和69.64％：對(duì)病原白僵菌細(xì)胞內(nèi)電解質(zhì)外滲率的傷害率隨大蒜素濃度的升高而增加,也就是對(duì)細(xì)胞原生質(zhì)膜的傷害率增大；對(duì)ATPase活力測(cè)定發(fā)現(xiàn)大蒜素處理組與對(duì)照組比較而言,真菌細(xì)胞中的各種ATPase活力都有大幅度的降低。其中Na+K+-ATPase降低了84.36％,Ca++Mg++-