2R，4R-APDC對大鼠癲癇持續(xù)狀態(tài)后結(jié)構(gòu)和功能可塑性變化的影響.pdf

1、第一部分 匹羅卡品誘發(fā)大鼠癲癇持續(xù)狀態(tài)后海馬結(jié)構(gòu)可塑性變化的動(dòng)態(tài)觀察 目的：研究匹羅卡品顳葉癲癇模型大鼠行為學(xué)、電生理及神經(jīng)可塑性變化，進(jìn)一步探討癲癇反復(fù)發(fā)作的病理基礎(chǔ)。 方法：成年雄性SD大鼠，腹腔注射匹羅卡品誘發(fā)大鼠出現(xiàn)癲癇持續(xù)狀態(tài)(status epilepticus，SE)，SE持續(xù)3h后注射地西泮終止發(fā)作。其后每天觀察記錄大鼠有無自發(fā)性癇性發(fā)作(spontaneous recurrent seizure

2、s，SRS)，于致癇后3h、7d和45d分別對大鼠進(jìn)行EEG描記，并將大鼠在各時(shí)間點(diǎn)斷頭取腦，用HE、Nissl和Timm染色觀察大鼠海馬病理學(xué)改變，并用BrdU標(biāo)記新生神經(jīng)元，利用免疫熒光三標(biāo)觀察其與NeuN或GFAP的共表達(dá)情況。 結(jié)果：匹羅卡品致癇大鼠SE的誘發(fā)率為87％；EEG在急性期表現(xiàn)為叢集性棘波放電，潛伏期EEG正常，慢性癇性發(fā)作期可見癲癇樣放電；HE、Nissl及Timm染色可觀察到大鼠海馬神經(jīng)元損傷、星形膠質(zhì)細(xì)

3、胞增生和苔蘚纖維出芽(mossy fiber sprouting，MFS)；BrdU+NeuN+GFAP三標(biāo)免疫熒光染色顯示，匹羅卡品致癇后齒狀回新生神經(jīng)細(xì)胞數(shù)增多，并隨時(shí)間發(fā)展出現(xiàn)異位遷移，可出現(xiàn)在內(nèi)分子層和門區(qū)，最終分化為神經(jīng)元和膠質(zhì)細(xì)胞。 結(jié)論：匹羅卡品致癇后根據(jù)大鼠行為學(xué)和EEG改變可分為急性期、靜息期和慢性期，可造成海馬神經(jīng)元損傷、星形膠質(zhì)細(xì)胞增生、苔蘚纖維出芽和神經(jīng)發(fā)生增加等可塑性改變，這些病理改變可能與自發(fā)性癲癇的

4、發(fā)復(fù)發(fā)作有關(guān)。 第二部分2R,4R-APDC對匹羅卡品誘發(fā)大鼠癲癇持續(xù)狀態(tài)后海馬神經(jīng)發(fā)生的影響 目的：利用BrdU標(biāo)記處于分裂期的細(xì)胞以觀察Ⅱ組mGluR激動(dòng)劑2R，4R-4-aminopyrrolidine-2,4-dicarboxylate(2R，4R-APDC)對匹羅卡品誘發(fā)成年SD大鼠癲癇持續(xù)狀態(tài)后海馬齒狀回神經(jīng)發(fā)生的影響。 方法：成年SD大鼠側(cè)腦室內(nèi)注射2R，4R-APDC或生理鹽水1小時(shí)后，腹腔注射匹

5、羅卡品誘發(fā)癲癇持續(xù)狀態(tài)(status epilepticus，SE)，觀察大鼠行為學(xué)改變，在處死前一天注射BrdU以標(biāo)記新生細(xì)胞，取海馬切片做BrdU單標(biāo)免疫組化染色計(jì)數(shù)新生細(xì)胞；做BrdU與NeuN和GFAP的免疫熒光雙標(biāo)染色，利用激光共聚焦技術(shù)檢測細(xì)胞增殖情況并鑒定細(xì)胞類型。 結(jié)果：經(jīng)2R，4R-APDC預(yù)處理的大鼠可延長SE發(fā)生的潛伏期，并顯著降低SE的發(fā)生，對致癇后的行為學(xué)改變有明顯的改善作用；可顯著減少致癇大鼠海馬齒狀

6、回新生細(xì)胞數(shù)量，其中SGZ/GCL區(qū)域的新生細(xì)胞數(shù)量由1457.71±283.14減少為709.33±62.61(p＜0.05)，而門區(qū)的數(shù)量則由242.71±減少為140.67(p＜0.01)。但2R，4R-APDC對各組間新生細(xì)胞分化為神經(jīng)元和星形膠質(zhì)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化率無影響。 結(jié)論：2R，4R-APDC有顯著的抗癲癇作用并且可以抑制SE后的神經(jīng)發(fā)生，更重要的是可以抑制新生細(xì)胞的異位遷移，從而影響SE后海馬結(jié)構(gòu)的可塑性重建，抑制癲

7、癇的發(fā)作。但2R，4R-APDC對新生細(xì)胞的分化傾向無明顯影響，絕大多數(shù)分化為神經(jīng)元，少數(shù)分化為星形膠質(zhì)細(xì)胞。 第三部分2R，4R-APDC對匹羅卡品致癇大鼠學(xué)習(xí)和記憶功能的影響 目的：研究選擇性II組mGluRs激動(dòng)劑2R，4R-APDC對成年SD大鼠匹羅卡品致癇后學(xué)習(xí)、記憶功能的影響。 方法：復(fù)制匹羅卡品大鼠模型，隨機(jī)分為4組：A組(APDC+EP)：B組(NS+EP)；C組(APDC)：D組(NS)分別腦室

8、內(nèi)注射2R，4R-APDC和生理鹽水，24h后開始進(jìn)行行為學(xué)觀察，并進(jìn)行抬高迷宮實(shí)驗(yàn)(elevated plus maze test)記錄5min內(nèi)大鼠在開放臂中逃避的時(shí)間及進(jìn)入的次數(shù)。進(jìn)行Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)(motris watermaze test)，分別做定位航行試驗(yàn)記錄逃避潛伏期；空間探索試驗(yàn)測其在120秒內(nèi)跨過直徑為10cm的原平臺所在位置的次數(shù)、在原平臺象限搜索時(shí)間占總時(shí)間(120s)的百分比及搜尋策略。 結(jié)果：

9、本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，致癇后可引發(fā)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物活動(dòng)習(xí)性的改變，表現(xiàn)為警覺水平、恐懼、焦慮等防護(hù)性情感反應(yīng)下降及空間學(xué)習(xí)和記憶能力受損。應(yīng)用2R，4R-APDC后，致癇大鼠的恐懼、焦慮明顯減輕，雖有輕度嗜睡等中樞抑制作用，但持續(xù)時(shí)間短，多在用藥1周后消失；2R，4R-APDC可以顯著改善情感反應(yīng)，使進(jìn)入開放臂的時(shí)間和次數(shù)明顯減少(P＜0.05)；致癇后大鼠的逃避潛伏期延長，記憶站臺所在位置的能力明顯下降并可以使大鼠的搜尋策略變差，學(xué)習(xí)能力下降。腦室