電針百會(huì)、神庭穴調(diào)控MCAO-R大鼠海馬miR-134的表達(dá)對(duì)突觸可塑性的影響.pdf

1、目的:
　　探討電針百會(huì)、神庭穴是否通過miR-134調(diào)控LIMK1(lim-domain containingprotein kinase1)表達(dá)及其磷酸化水平，影響海馬突觸可塑性的變化，從而改善MCAO/R(Middle Cerebral Artery Occlusion/Reperfusion)大鼠學(xué)習(xí)記憶功能的可能機(jī)制。
　　方法:
　　將雄性SD(Sprague-Dawley)大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組和造模組，造

2、模組復(fù)制Koizumi線栓法，制備左側(cè)大腦中動(dòng)脈缺血再灌注損傷動(dòng)物模型。依據(jù)Zea-Longa神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分及造模24 h后MRI的T2WI結(jié)果，將造模成功的大鼠隨機(jī)分為模型組、電針組和非穴組。術(shù)后24 h，開始行電針干預(yù)，電針組穴位取百會(huì)、神庭穴，疏密波，頻率2/20 Hz，每次電針30 min，每天1次，共干預(yù)14d;非穴組取雙側(cè)脅下非經(jīng)非穴，刺激強(qiáng)度、時(shí)間及干預(yù)天數(shù)同電針組。干預(yù)的第10d開始采用Morris水迷宮檢測(cè)大鼠的空間學(xué)

3、習(xí)記憶能力;干預(yù)的第14d行小動(dòng)物核磁共振觀察腦損傷情況;取材后采用Golgi染色法觀察左側(cè)海馬CA1區(qū)樹突棘形態(tài);采用免疫印跡法檢測(cè)左側(cè)海馬CA1區(qū)LIMK1蛋白及磷酸化水平;采用實(shí)時(shí)熒光定量法檢測(cè)海馬miR-134的表達(dá)水平。
　　結(jié)果:
　　(1)神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分結(jié)果示:腦缺血再灌注損傷后，與假手術(shù)組大鼠相比，模型組、電針組及非穴組大鼠神經(jīng)功能缺損評(píng)分均顯著升高(P＜0.01)，且三組之間Zea-Longa神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分

4、無明顯差異(P＞0.05);電針治療14d后，電針組大鼠的神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分明顯優(yōu)于模型組、非穴組(P＜0.01)，表明電針百會(huì)、神庭穴可以改善MCAO/R大鼠的神經(jīng)功能缺損的癥狀。
　　(2)跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)結(jié)果示:腦缺血再灌注損傷后，與假手術(shù)組大鼠相比，模型組、電針組及非穴組大鼠平臺(tái)停留時(shí)間均顯著減少(P＜0.01)，但此三組之間平臺(tái)停留時(shí)間無明顯差異（P＞0.05）;電針治療14d后，電針組大鼠的平臺(tái)停留時(shí)間明顯多于模型組、非穴組(P＜

5、0.01)，表明電針百會(huì)、神庭穴可以改善MCAO/R大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力缺損的癥狀。
　　(3)水迷宮實(shí)驗(yàn):定向航行實(shí)驗(yàn)顯示:假手術(shù)組大鼠逃避潛伏期小于其他各組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。電針組大鼠逃避潛伏期小于模型組、非穴組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);空間探索實(shí)驗(yàn)顯示，假手術(shù)組大鼠穿越平臺(tái)次數(shù)多于其他各組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，電針組大鼠穿過平臺(tái)次數(shù)多于模型組、非穴組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

6、表明電針百會(huì)、神庭穴可以改善MCAO/R大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力。
　　(4)小動(dòng)物MRI成像結(jié)果示:對(duì)實(shí)驗(yàn)大鼠進(jìn)行T2WI掃描，觀察腦梗死面積。腦缺血再灌注損傷后24 h，模型組、電針組及非穴組大鼠腦損傷體積無明顯差異(P＞0.05);干預(yù)14d后，與模型組和非穴組相比，電針組大鼠的腦損傷體積均明顯減少（P＜0.05）。
　　(5) Golgi染色結(jié)果示:干預(yù)14 d后，與模型組相比，電針組大鼠左側(cè)海馬CA1區(qū)樹突棘形態(tài)明顯較完

7、整，數(shù)量明顯增多，具有顯著性差異(P＜0.01);非穴組與模型組相比，無明顯差異(P＞0.05);
　　(6)投射電鏡結(jié)果示:干預(yù)14d后，與模型組相比，電針組大鼠左側(cè)海馬CA1區(qū)突觸數(shù)量明顯增多，具有顯著性差異(P＜0.01);非穴組與模型組相比，無明顯差異(P＞0.05);
　　(7)蛋白免疫印跡法檢測(cè)結(jié)果示:LIMK1、P-LIMK1在四組的左側(cè)海馬均有表達(dá);較假手術(shù)相比，模型組LIMK1、P-LIMK1的表達(dá)明顯降低

8、，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，說明腦缺血可抑制LIMK1、P-LIMK1的表達(dá);干預(yù)14 d后，與模型組相比，電針組的LIMK1、P-LIMK1的含量表達(dá)明顯增多，有顯著性差異(P＜0.01)，說明了電針促進(jìn)了海馬中LIMK1的磷酸化。
　　(8)實(shí)時(shí)熒光定量結(jié)果示:干預(yù)14d后，與模型組相比，電針組大鼠左側(cè)海馬CA1區(qū)miR-134的表達(dá)明顯減少，具有顯著性差異(P＜0.01);非穴組與模型組相比無明顯差異(P＞0.05)