復(fù)合功能超微磁性基因載體的研究.pdf

1、本文以共沉淀法制備了表面分別包覆O-羧甲基殼聚糖和殼聚糖一賴氨酸并具有超順磁特性的超微磁性載體粒子.并對四氧化三鐵超微磁性粒子的制備條件(表面活性劑、氣體保護(hù)、溫度與強(qiáng)弱堿)進(jìn)行研究.得出制備磁性載體粒子的最佳制備條件.制出的磁性粒子平均粒徑50nm,粒徑分布均勻,且表面形貌光滑. 通過透射電子顯微鏡,紅外吸收光譜分析,激光粒度儀,Zeta電位儀,VSM法磁性能分析,x射線光電子能譜和X射線衍射儀等表征顯示,O-羧甲基殼聚糖超微

2、磁性載體粒子和殼聚糖-賴氨酸超微磁性載體粒子的平均粒徑為100nm,分布均勻,且表面形貌光滑,具有良好的超順磁特性. 通過超微磁性載體粒子表面吸附pGFP質(zhì)粒DNA,測得O-羧甲基殼聚糖超微磁性載體粒子基因荷載率為64.7﹪,殼聚糖-賴氨酸超微磁性載體粒子基因荷載率為80.1﹪.細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,兩種基因載體均能成功表達(dá)綠色熒光蛋白,證明超微磁性載體粒子可以成功實(shí)現(xiàn)基因轉(zhuǎn)染.通過螢光素酶轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)確定了載體粒子轉(zhuǎn)染效率,同時用

3、MTT法測定了載體粒子的細(xì)胞毒性,并根據(jù)國家標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行細(xì)胞毒性分級.結(jié)果顯示,O-羧甲基殼聚糖和殼聚糖一賴氨酸超微磁性載體粒子的細(xì)胞毒性均為1級,無明顯生物毒性. 在以上實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上,將跨膜肽Tat和轉(zhuǎn)鐵蛋白(Transferriln)連接到O-羧甲基殼聚糖超微磁性載體粒子表面,形成具有跨膜和磁性及受體介導(dǎo)復(fù)合靶向功能的超微磁性載體粒子(Tat-Tf-MNP).以<'99m>Tc放射性標(biāo)記Tat-Tf-MNP,SD大鼠尾靜脈注射,單