硫酸軟骨素酶ABC治療脊髓損傷時間窗的研究.pdf

1、目的：建立大鼠脊髓半橫斷損傷模型，為研究脊髓損傷后的病理、生理變化過程及治療效果提供穩(wěn)定的實驗平臺，研究硫酸軟骨素酶ABC(ChABC)對大鼠脊髓損傷修復的影響，探討ChABC治療脊髓損傷的時間窗。 方法：1.將150只成年雄性Wistar大鼠，隨機分為6組制作脊髓半橫斷損傷模型，其中對照組只行脊髓損傷不給藥物治療。余按照不同給藥時間分為5個組：傷后立即給藥組、傷后1d給藥組、傷后3d給藥組、傷后7d給藥組、傷后14d給藥組，分

2、別于相應時間點予鞘內注射ChABC治療，n=25。 2.分別在傷前、傷后定期進行BBB功能評分，連續(xù)觀察3個月脊髓損傷大鼠運動功能恢復情況。分別在傷后1w、2w.4w、8w隨機處死各組大鼠3只，進行HE染色及免疫組化GFAP、NG2染色，Western blot檢測觀察傷后脊髓膠質瘢痕組織形態(tài)變化情況及硫酸軟骨素蛋白聚糖(CSPGs)表達水平。 結果：1.大鼠脊髓半橫斷損傷模型成功穩(wěn)定，傷口整齊，重復性好，損傷程度恒定，

3、解剖定位準確，功能障礙亦確定，便于進行脊髓損傷的基礎理論研究和神經生物學觀察。 2.BBB評分示傷后3d內各組大鼠BBB評分均低至0～1分，各組無明顯差異(P>0.05)。隨后BBB評分逐漸增高，脊髓損傷后1～8w脊髓功能恢復較快，8w時傷后立即給藥組、1d給藥組、3d給藥組、7d給藥組運動評分高于對照組，差異顯著(P<0.05)，14d給藥組與對照組差異不明顯(P>0.05)。繼續(xù)觀察至第12w傷后立即給藥組、1d給藥組、3d

4、給藥組、7d給藥組運動評分明顯高于對照組，差異顯著(P<0.05)，14d給藥組與對照組差異不明顯(P>0.05)。 3.HE染色顯示：傷后對照組大鼠脊髓星形膠質細胞大量增生，膠質瘢痕及空洞形成。治療組可見到膠質瘢痕比對照組形成較輕。免疫組化顯示：傷后各組脊髓損傷區(qū)GFAP的表達均增高，各組之間沒有統計學差異(P>0.05)，說明ChABC對星形膠質細胞沒有直接作用。 4.經NG2免疫組化、Western blot檢測發(fā)

5、現：CSPGs的表達水平傷后即增高，2w達到高峰。1w時傷后立即給藥組、1d給藥組、3d給藥組、7d給藥組CSPGs明顯低于對照組，差異顯著(P<0.05)，14d給藥組與對照組差異不明顯(P>0.05)。2w時傷后立即給藥組、1d給藥組、3d給藥組、7d給藥組CSPGs明顯低于對照組，差異顯著(P<0.05)，14d給藥組與對照組差異不明顯(P>0.05)。4w時傷后立即給藥組、1d給藥組、3d給藥組、7d給藥組CSPGs明顯低于對照

6、組，差異顯著(P<0.05)，14d給藥組與對照組差異不明顯(P>0.05)。 結論：1.大鼠脊髓半橫斷損傷模型可重復性高，一致性好；保留二便功能，并發(fā)癥少，動物長期存活率高；適合進行脊髓損傷的基礎性神經生物學研究。 2.ChABC能促進鼠脊髓損傷后運動功能恢復，ChABC能在大鼠脊髓損傷后抑制膠質瘢痕形成，并能促進神經細胞的修復。 3.ChABC治療大鼠脊髓損傷呈時效依賴性，傷后立即應用效果最好，傷后1周內治療